泡膜運(yùn)輸是介導(dǎo)真核細(xì)胞蛋白質(zhì)分泌途徑的主要方式。科學(xué)家已經(jīng)成功鑒定出三種運(yùn)輸小泡:網(wǎng)格蛋白有被小泡,COPⅠ有被小泡和COPⅡ有被小泡。其中COPⅠ有被小泡上的ε-COP蛋白在高爾基體內(nèi)部以及高爾基體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)之間的蛋白質(zhì)運(yùn)輸中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。科學(xué)家通過(guò)一定的技術(shù)手段,制備了水稻ε-COP蛋白的單克隆抗體。
(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增水稻ε-COP蛋白基因,PCR反應(yīng)需在一定的緩沖溶液中才能進(jìn)行,主要成分包括:DNA模板、2種引物2種引物,4種脫氧核苷酸和TaqDNA聚合酶TaqDNA聚合酶。
(2)研究人員通過(guò)一定的技術(shù)手段,將ε-COP蛋白基因與運(yùn)載體結(jié)合,得到如圖所示重組表達(dá)載體,據(jù)圖分析:
①該重組表達(dá)載體用到的限制酶是BamHI和XhoIBamHI和XhoI。研究人員將其導(dǎo)入大腸桿菌常用方法是CaCl2轉(zhuǎn)化法CaCl2轉(zhuǎn)化法。
②接下來(lái)研究人員將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含有氨芐青霉素(Amp)氨芐青霉素(Amp)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間,長(zhǎng)出的菌落即為轉(zhuǎn)化成功的大腸桿菌。
③研究人員以大腸桿菌作為受體細(xì)胞,相對(duì)酵母菌而言,具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、繁殖快、易培養(yǎng)、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少、外源蛋白表達(dá)量高結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、繁殖快、易培養(yǎng)、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少、外源蛋白表達(dá)量高(答出兩點(diǎn)即可)等優(yōu)點(diǎn)。
(3)利用聚丙烯酰胺凝膠電泳將重組水稻ε-COP蛋白提純后,取適量重組蛋白分多次皮下注射家兔,10天后大量采血收集抗血清。注射的重組蛋白相當(dāng)于抗原抗原,多次注射的目的是:產(chǎn)生大量的漿細(xì)胞,分泌更多抗體產(chǎn)生大量的漿細(xì)胞,分泌更多抗體。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】2種引物;TaqDNA聚合酶;BamHI和XhoI;CaCl2轉(zhuǎn)化法;氨芐青霉素(Amp);結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、繁殖快、易培養(yǎng)、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少、外源蛋白表達(dá)量高;抗原;產(chǎn)生大量的漿細(xì)胞,分泌更多抗體
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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