血凝素基因（HA）編碼的血凝素是構(gòu)成流感病毒囊膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個(gè)亞單位，其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點(diǎn)。IgGFc基因片段（長(zhǎng)度為717bp）編碼人IgG抗體中的一段小肽，常作為融合蛋白標(biāo)簽。蛋白質(zhì)分泌依賴于信號(hào)肽的引導(dǎo)，本研究中用信號(hào)肽IL-2SS代替HA自身信號(hào)肽，科研人員嘗試構(gòu)建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達(dá)載體，并導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)和分泌，請(qǐng)回答：
（1）流感病毒囊膜主要由
蛋白質(zhì)和磷脂
蛋白質(zhì)和磷脂
組成，囊膜上血凝素的合成場(chǎng)所在 宿主細(xì)胞的核糖體
宿主細(xì)胞的核糖體
。
（2）本實(shí)驗(yàn)用信號(hào)肽IL-2SS代替HA自身信號(hào)肽有利于 融合蛋白表達(dá)并避免自身產(chǎn)生的融合蛋白與自身受體結(jié)合
融合蛋白表達(dá)并避免自身產(chǎn)生的融合蛋白與自身受體結(jié)合
，PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)應(yīng)該選擇圖中引物 b
b
。
（3）設(shè)計(jì)引物時(shí)，不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列，原因是 若設(shè)計(jì)引物是含有HA1的終止密碼子，則核糖體讀到終止密碼子時(shí)就停止翻譯，導(dǎo)致IgGFc基因不能正常表達(dá)
若設(shè)計(jì)引物是含有HA1的終止密碼子，則核糖體讀到終止密碼子時(shí)就停止翻譯，導(dǎo)致IgGFc基因不能正常表達(dá)
。引物序列的長(zhǎng)度及 CG含量
CG含量
直接影響著PCR過(guò)程中退火溫度的設(shè)定。
（4）應(yīng)選擇限制酶 EcoRV
EcoRV
來(lái)切割質(zhì)粒A，然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合，同時(shí)加入 DNA連接
DNA連接
酶，使得目的基因與質(zhì)粒A相連。若目的基因與質(zhì)粒A正向連接，用BamHⅠ和SacⅠ同時(shí)切割重組質(zhì)粒，完全酶切后的產(chǎn)物的長(zhǎng)度約為 717
717
bp。
（5）融合蛋白中的標(biāo)簽蛋白有利于目的蛋白的分離和純化，基因工程生產(chǎn)HA1作為疫苗時(shí)，選擇人IgGFc作為標(biāo)簽的優(yōu)點(diǎn)還有 人體自身即可產(chǎn)生IgG抗體，避免了制作單克隆抗體的復(fù)雜過(guò)程
人體自身即可產(chǎn)生IgG抗體，避免了制作單克隆抗體的復(fù)雜過(guò)程
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