糖化酶是將淀粉轉化為葡萄糖的酶，大部分野生酵母菌因缺乏糖化酶基因而不能直接利用淀粉。研究人員將經誘變處理后獲取的黑曲霉菌高產糖化酶基因導入畢赤酵母GS115（對氨芐青霉素不敏感）中，構建能直接利用淀粉的工程菌，該過程所用質粒（僅示部分結構）如圖1所示。質粒的外側鏈為a鏈，內側鏈為b鏈?；駻mpr轉錄的模板鏈屬于b鏈的片段。三種限制酶的識別序列及切割位點見下表。請回答下列問題。
（1）為獲得糖化酶高產菌株，研究人員將經誘變處理后的黑曲霉菌接種到
淀粉
淀粉
含量高的培養(yǎng)基上，恒溫培養(yǎng)適宜時間后滴加碘液，挑選出透明圈（不產生藍色）直徑 較大
較大
（填“較大”或“較小”）的菌株。再進行復篩以及穩(wěn)定性遺傳實驗。
（2）質粒復制的模板鏈是 a和b
a和b
（選填“a”、“b”、“a和b”、“a或b”）鏈。高產糖化酶基因插入質粒后，其轉錄的模板鏈屬于 a
a
鏈的片段。
| 限制酶 |
BamHⅠ |
PstⅠ |
XbaⅠ |
| 識別序列和切割位點（5'→3'） |
G↓GATCC |
C↓TGCAG |
T↓CTAGA |
|
相關結構：
PAOXI：甲醇誘導型強啟動子
TAOXI：終止子
HIS4：組氨酸脫氫酶基因，其表達產物催化組氨酸合成
Orl：復制原點
Ampr：氨芐青霉素抗性基因 |
（3）構建高產糖化酶基因表達載體時，用限制酶切割質粒pPIC9K，圖2是高產糖化酶基因示意圖（僅示部分堿基），為使其能定向插入表達載體并成功表達，引物應包含
BamHI和XbaI
BamHI和XbaI
（BamHⅠ/PstⅠ/XbaⅠ）酶識別序列，則PCR擴增時引物的減基序列為
①④
①④
。（多選）
①5'-TCTAGATCTGTTGAAT-3'②5'-TCTAGAAGACAACTTA-3'
③5'-CTGCAGCTTGGATGAT-3'④5'-GGATCCCTTGGATGAT-3'
⑤5'-GGATCCGAACCTACTA-3'⑥5'-CTCGAGTCTGTTGAAT-3'
