如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源。該酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現(xiàn)表達(dá)。已知當(dāng)甲醇作為唯一碳源時，該酵母菌中AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)（5'AOX1和3'AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子）。請分析回答：
（1）為實現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，應(yīng)該選擇SnaBI AvrⅡSnaBI AvrⅡ切割質(zhì)粒，并在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上相應(yīng)的限制酶識別序列相應(yīng)的限制酶識別序列，這樣設(shè)計的優(yōu)點(diǎn)是確保定向連接（避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化及自連）確保定向連接（避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化及自連）。
（2）酶切獲取HBsAg基因后，需用DNA連接酶DNA連接酶將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取大量重組質(zhì)粒大量重組質(zhì)粒。
（3）步驟3中應(yīng)選用限制酶BglⅡBglⅡ來切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA，然后再將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞。
（4）為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入卡拉霉素卡拉霉素以便篩選：若要檢測轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞中是否含有HBsAg基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，可以用分子雜交分子雜交方法進(jìn)行檢測。
（5）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入甲醇甲醇以維持其生活，同時誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】SnaBI AvrⅡ；相應(yīng)的限制酶識別序列；確保定向連接（避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化及自連）；DNA連接酶；大量重組質(zhì)粒；BglⅡ；卡拉霉素；分子雜交；甲醇
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：4難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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