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CRISPR-Cpf1敲除系統(tǒng)是Cpf1-crRNA復(fù)合體，利用crRNA引導(dǎo)Cpf1結(jié)合到靶DNA的特定序列上并切割雙鏈DNA分子。利用此系統(tǒng)在基因特定部位切割，再通過同源重組作用去除靶基因，進一步利用質(zhì)粒自身的溫敏特性將質(zhì)粒消除，從而完成基因敲除。為研究精氨酸代謝調(diào)控因子基因（argR基因）對精氨酸代謝的影響，科研人員利用上述技術(shù)敲除谷氨酸棒狀桿菌argR基因，過程如圖1。其中kanr是卡那霉素抗性基因，argR-HR1和argR-HR2是argR基因兩側(cè)的部分序列。請回答下列問題：
菁優(yōu)網(wǎng)
（1）①過程通過PCR獲得argR-HR1和argR-HR2，該過程的原料是
4種游離的脫氧核苷酸（dNTP）
4種游離的脫氧核苷酸（dNTP）
，所需的酶是
Taq酶
Taq酶
。
（2）②過程需要的酶是
限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶
限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶
，③過程應(yīng)用
Ca2+（或CaCl2）
Ca2+（或CaCl2）
處理谷氨酸棒狀桿菌使其能吸收質(zhì)粒2。
（3）④過程經(jīng)過
轉(zhuǎn)錄、翻譯
轉(zhuǎn)錄、翻譯
表達出了Cpf1，與DNA復(fù)制相比，⑤過程特有的堿基互補配對方式是
A-U
A-U
。
（4）⑥過程中Cpf1-crRNA復(fù)合體的作用有
識別DNA分子上特定的堿基序列，并進行切割
識別DNA分子上特定的堿基序列，并進行切割
。⑦過程在同源重組酶的作用下，谷氨酸棒狀桿菌基因組中的
argR
argR
基因被敲除。
（5）由于質(zhì)粒2的溫敏特性，⑧過程在37℃條件下培養(yǎng)的目的是
消除質(zhì)粒
消除質(zhì)粒
。
（6）為了驗證過程⑧后重組菌種的抗性，通過影印接種（A、B兩個培養(yǎng)基中接種菌種的位置相同）培養(yǎng)，結(jié)果如圖2，其中
能在A培養(yǎng)基上生長，不能在B培養(yǎng)基上生長的菌株
能在A培養(yǎng)基上生長，不能在B培養(yǎng)基上生長的菌株
是完成目的基因被敲除的菌株。

【答案】4種游離的脫氧核苷酸（dNTP）；Taq酶；限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶；Ca2+（或CaCl2）；轉(zhuǎn)錄、翻譯；A-U；識別DNA分子上特定的堿基序列，并進行切割；argR；消除質(zhì)粒；能在A培養(yǎng)基上生長，不能在B培養(yǎng)基上生長的菌株
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：5引用：2難度：0.7
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  • 1．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運用交錯延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項正確的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)
    注：①交錯延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細胞中特異性啟動基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細胞合成生長素。

    發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

  • 2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　　）
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    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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