內(nèi)皮素(ET)是一種多肽,主要通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的ET受體(ETA)結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng).科研人員通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)ETA基因在大腸桿菌細(xì)胞中的高效表達(dá),其過(guò)程如下圖所示,圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為,限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為.請(qǐng)據(jù)圖分析回答:
(1)進(jìn)行過(guò)程①時(shí),需要加入緩沖液、引物、dNTP和 反轉(zhuǎn)錄(逆轉(zhuǎn)錄)反轉(zhuǎn)錄(逆轉(zhuǎn)錄)酶等.完成過(guò)程①②③的目的是 獲取目的基因(ETA基因)獲取目的基因(ETA基因).
(2)過(guò)程③和⑤中,限制酶XhoⅠ切割DNA,使 磷酸二酯磷酸二酯鍵斷開(kāi),形成的黏性末端是 .
(3)構(gòu)建的重組表達(dá)載體,目的基因上游的啟動(dòng)子是 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,進(jìn)而可驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄.除圖中已標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外,基因表達(dá)載體還應(yīng)具有的結(jié)構(gòu)是 終止子終止子.
(4)過(guò)程⑥要用CaCl2預(yù)先處理大腸桿菌,使其成為容易吸收外界DNA的 感受態(tài)感受態(tài)細(xì)胞.
(5)將SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因,其目的是有利于檢測(cè) ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量.
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】反轉(zhuǎn)錄(逆轉(zhuǎn)錄);獲取目的基因(ETA基因);磷酸二酯;;RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合;終止子;感受態(tài);ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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