番茄紅素是類(lèi)胡蘿卜素的一種，存在于番茄、西瓜等水果及一些蔬菜中，是目前自然界中存在的抗氧化、抗衰老和預(yù)防腫瘤能力最強(qiáng)的物質(zhì)之一，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)合成番茄紅素的功能基因是CrtE、CrtB與Crtl。為解決植物提取法產(chǎn)量低的問(wèn)題，研究人員試通過(guò)基因工程技術(shù)來(lái)獲得大量的番茄紅素。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）為提高轉(zhuǎn)化效率，研究者根據(jù)CrtE、CrtB與Crtl基因序列及其蛋白產(chǎn)物等，將三個(gè)基因優(yōu)化設(shè)計(jì)為CrtEBI基因，并通過(guò)

化學(xué)（人工）

化學(xué)（人工）

法獲得了該基因。為了使目的基因能與表達(dá)載體正確連接，需在目的基因的兩端加上

合成兩種不同限制酶識(shí)別序列

合成兩種不同限制酶識(shí)別序列

。
（2）利用

（兩種不同）限制酶與DNA連接酶

（兩種不同）限制酶與DNA連接酶

酶將含有CrtEBI基因的DNA片段與質(zhì)粒pTRC99a相連。使用CaCl₂處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于一種

能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子

能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子

的生理狀態(tài)，進(jìn)而將重組表達(dá)載體倒入其中。
（3）待培養(yǎng)12h后，挑取單菌落進(jìn)行PCR驗(yàn)證以確定受體細(xì)胞是否被成功導(dǎo)入目的基因。若擴(kuò)增后的DNA樣品電泳結(jié)果如圖1，則圖2（深色部分為目的基因區(qū)段）中對(duì)應(yīng)泳道1和泳道2的引物組合分別為

3、4

3、4

和

1、2

1、2

。（填序號(hào)）