常見的探針有核酸探針和蛋白質探針。兩種探針結構和功能均不相同,故而應用在不同的檢測中。而兩種探針的制備過程中所應用的技術也不相同。請回答下列問題。
Ⅰ、蛋白質探針的制備。
(1)蛋白質探針常用 單克隆抗體單克隆抗體技術來制備。該技術的基本流程是將 特定的抗原特定的抗原注射給實驗動物,獲取的脾細胞與骨髓瘤細胞融合后,用HAT培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)對象。該篩選過程得到的雜交瘤細胞是產生 抗體抗體的雜交瘤細胞,接下來要經過 抗體抗體檢測來獲得產生特定蛋白的雜交瘤細胞。最終將純化得到的特定蛋白結合上熒光或放射性標記,即為蛋白質探針。
(2)上述HAT培養(yǎng)基是 液體液體(填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基。融合成雜交瘤細胞后再檢測尋找產生特定目標蛋白的雜交瘤細胞,而不直接在脾細胞中尋找產生特定蛋白的B淋巴細胞的原因是 B淋巴細胞不能分裂,不具備克隆化的能力,培養(yǎng)產生的抗體濃度低,不足以檢測B淋巴細胞不能分裂,不具備克隆化的能力,培養(yǎng)產生的抗體濃度低,不足以檢測。
Ⅱ、不對稱PCR是利用不等量的一對引物來產生大量單鏈DNA(ssDNA)的方法。該方法制備的ssDNA結合上熒光或放射性標記,即為核酸探針。
(3)不對稱PCR中加入的一對引物中含量較少的被稱為限制性引物,含量較多的被稱為非限制性引物。兩者的比例通常為1:100。PCR反應的最初的若干次循環(huán)中,其擴增產物主要是雙鏈DNA(dsDNA),但當限制性引物消耗完后,就會產生大量的ssDNA。據下圖可知,最后大量獲得的ssDNA是圖中的 甲甲(填“甲”或“乙”)鏈。
(4)若反應最初有a個模板DNA分子,最初的6次循環(huán)擴增產生dsDNA,后10個循環(huán)均只擴增ssDNA,則需要限制性引物 (27-2)a2(27-2)a2個。請繪制這16個循環(huán)中ssDNA的分子數量隨循環(huán)次數的變化圖2。(說明:縱軸的刻度請自行標注。)
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【考點】單克隆抗體及其應用;DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】單克隆抗體;特定的抗原;抗體;抗體;液體;B淋巴細胞不能分裂,不具備克隆化的能力,培養(yǎng)產生的抗體濃度低,不足以檢測;甲;
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【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/9/12 1:0:10組卷:1引用:1難度:0.5
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