PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫，是一項(xiàng)在體外提供參與DNA復(fù)制的組分與反應(yīng)條件，對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。如圖為PCR獲取并擴(kuò)增目的基因的示意圖，引物的3端有結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵堿基，5′端堿基無(wú)嚴(yán)格限制。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：
（1）PCR的原理是 DNA半保留復(fù)制DNA半保留復(fù)制，PCR過(guò)程中所用的酶是 耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）。
（2）PCR的每次循環(huán)一般包括 變性、復(fù)性、延伸變性、復(fù)性、延伸三步，在PCR過(guò)程中，新合成的DNA子鏈的延伸方向是 5’→3’5’→3’，PCR獲取目的基因時(shí)；在第 33次循環(huán)后反應(yīng)體系中可出現(xiàn)目的基因。
（3）PCR獲取目的基因時(shí)，引物的作用是 界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點(diǎn)并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點(diǎn)并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸。為了方便目的基因與質(zhì)粒的連接，可在引物的5’5’端添加限制酶識(shí)別序列。若引物上的限制酶識(shí)別序列為CCC↓GGG，在用一種酶連接目的基因與質(zhì)粒時(shí)，所用的酶為 T4DNA連接酶T4DNA連接酶。
（4）科學(xué)設(shè)計(jì)引物是PCR能否成功的關(guān)鍵。若引物的堿基過(guò)多或引物的G、C含量過(guò)高，會(huì)造成PCR的效率偏低，收獲的目的基因較少，原因是 引物與模板鏈結(jié)合過(guò)于緊密，變性時(shí)引物不易與模板鏈脫離（影響變性）引物與模板鏈結(jié)合過(guò)于緊密，變性時(shí)引物不易與模板鏈脫離（影響變性）。若對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)或多個(gè)條帶，從引物角度分析，原因可能是 引物過(guò)短導(dǎo)致引物的特異性下降引物過(guò)短導(dǎo)致引物的特異性下降。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】DNA半保留復(fù)制；耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）；變性、復(fù)性、延伸；5’→3’；3；界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點(diǎn)并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸；5’；T4DNA連接酶；引物與模板鏈結(jié)合過(guò)于緊密，變性時(shí)引物不易與模板鏈脫離（影響變性）；引物過(guò)短導(dǎo)致引物的特異性下降
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：6引用：1難度：0.6
相似題
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過(guò)次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過(guò)的兩個(gè)過(guò)程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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