獼猴桃成熟過程中,ACC氧化酶(ACO)會退化乙烯前體物質(zhì)(ACC)轉(zhuǎn)化成乙烯,大量的乙烯會加速果實軟化和腐爛,縮短儲藏期。科學(xué)家通過基因工程將ACO基因反向連接在啟動子后,篩選轉(zhuǎn)反義ACO基因的獼猴桃,達到延長儲藏期的效果。操作過程如圖。
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回答下列問題:
(1)啟動子的基本組成單位是 脫氧核苷酸脫氧核苷酸,能識別啟動子的酶是 RNA聚合酶RNA聚合酶。
(2)為保證ACO基因能反向連接在重組質(zhì)粒的啟動子后,設(shè)計引物時需在ACO基因的上游引物和下游引物分別引入 SacⅠSacⅠ和 BamⅠBamⅠ限制酶切位點。
(3)從新鮮的獼猴桃葉片上取下若干圓形小片與農(nóng)桿菌共同培養(yǎng),Ti質(zhì)粒上的 T-DNAT-DNA區(qū)段可轉(zhuǎn)移到葉片細胞的染色體重;隨后,將圓形小片進行組織培養(yǎng),一段時間后,在培養(yǎng)基中加入 潮霉素潮霉素(填抗生素),可篩選出含目的基因的愈傷組織。
(4)為檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞,不能不能(填“能”或“不能”)用標記的ACO基因的單鏈作為探針進行檢測,原因是 受體細胞基因組中也含有ACO基因,所以?論?的基因是否導(dǎo)入受體細胞均能檢測到雜交信號受體細胞基因組中也含有ACO基因,所以?論?的基因是否導(dǎo)入受體細胞均能檢測到雜交信號。
(5)科學(xué)家成功篩向出一些轉(zhuǎn)反義ACO基因的獼猴桃,并檢測其ACO基因的表達量。結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因植株中的ACO基因表達量降為野生型的40%左右,原因是 轉(zhuǎn)反義基因獼猴桃轉(zhuǎn)錄出的RNA與ACO基因轉(zhuǎn)錄出的RNA堿基互補形成雙鏈,抑制了ACO基因的表達(翻譯),導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因植株中的ACO基因表達量降低為野生型的40%左右轉(zhuǎn)反義基因獼猴桃轉(zhuǎn)錄出的RNA與ACO基因轉(zhuǎn)錄出的RNA堿基互補形成雙鏈,抑制了ACO基因的表達(翻譯),導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因植株中的ACO基因表達量降低為野生型的40%左右。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】脫氧核苷酸;RNA聚合酶;SacⅠ;BamⅠ;T-DNA;潮霉素;不能;受體細胞基因組中也含有ACO基因,所以?論?的基因是否導(dǎo)入受體細胞均能檢測到雜交信號;轉(zhuǎn)反義基因獼猴桃轉(zhuǎn)錄出的RNA與ACO基因轉(zhuǎn)錄出的RNA堿基互補形成雙鏈,抑制了ACO基因的表達(翻譯),導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因植株中的ACO基因表達量降低為野生型的40%左右
【解答】
【點評】
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