神經(jīng)纖毛蛋白-1(NRP-1)能在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá),是血管內(nèi)皮生長因子家族成員的受體,通過參與多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進(jìn)腫瘤血管的生成。研究人員從腫瘤細(xì)胞中擴(kuò)增出NRP-1基因并將其導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),分離提純相應(yīng)NRP-1,并將其免疫小鼠,以制備抗NRP-1的單克隆抗體(NRP-1MAb)。分析回答下列問題:
(1)利用PCR技術(shù)可以從腫瘤細(xì)胞的基因組中分離擴(kuò)增得到完整的NRP-1基因,其原因是
根據(jù)目的基因兩端的堿基序列制備兩種引物,PCR技術(shù)根據(jù)DNA雙鏈復(fù)制的原理擴(kuò)增目的基因
根據(jù)目的基因兩端的堿基序列制備兩種引物,PCR技術(shù)根據(jù)DNA雙鏈復(fù)制的原理擴(kuò)增目的基因
。將擴(kuò)增后的目的基因構(gòu)建成表達(dá)載體后,導(dǎo)入用鈣離子溶液
鈣離子溶液
處理的大腸桿菌體內(nèi)完成轉(zhuǎn)化。
(2)研究人員將分離提純的NRP-1免疫小鼠后,取其脾臟中B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,在該培養(yǎng)基上不能存活的是未融合細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞
未融合細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞
。選取檢測抗體陽性的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時需要的氣體環(huán)境是95%的空氣和5%的二氧化碳
95%的空氣和5%的二氧化碳
。
(3)為進(jìn)一步確定NRP-1MAb靶向治療時的用藥方式,研究人員將直腸癌組織塊制成單細(xì)胞懸液,等量注入4組裸鼠右前腋下,接種3后天開始向培養(yǎng)液中施加NRP-1MAb藥物,每隔10天給藥1次,共4次。給藥后測算一次腫瘤體積,結(jié)果如圖所示:
分析如圖可以得出的結(jié)論是多次注射NRP-1MAb可明顯抑制腫瘤生長,且高劑量組與中劑量組的抑制效果基本相同
多次注射NRP-1MAb可明顯抑制腫瘤生長,且高劑量組與中劑量組的抑制效果基本相同
。根據(jù)實驗結(jié)果,請給出使用NRP-1MAb進(jìn)行靶向治療癌癥時的臨床建議:采用中劑量,每10天注射一次,連續(xù)注射4次
采用中劑量,每10天注射一次,連續(xù)注射4次
。