CRISPR/Cas9是一種高效的基因編輯技術(shù)，Cas9基因表達(dá)的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在單鏈向?qū)NA（SgRNA）引導(dǎo)下，切割DNA雙鏈以敲除目標(biāo)基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的工作原理如圖所示。
回答下列問題。
（1）過程①中，為構(gòu)建CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒，需對含有特定sgRNA編碼序列的DNA進(jìn)行酶切處理，然后將其插入到經(jīng)相同酶切處理過的質(zhì)粒上，插入時(shí)所需要的酶是 DNA連接酶DNA連接酶。
（2）過程②中，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞的方法是 感受態(tài)細(xì)胞法感受態(tài)細(xì)胞法。
（3）過程③～⑤中，SgRNA與Cas9蛋白形成復(fù)合體，該復(fù)合體中的SgRNA可識別并與目標(biāo)DNA序列特異性結(jié)合，二者結(jié)合所遵循的原則是 堿基互補(bǔ)配對原則堿基互補(bǔ)配對原則。隨后，Cas9蛋白可切割 目標(biāo)DNA特定的核苷酸目標(biāo)DNA特定的核苷酸序列。
（4）利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除一個(gè)長度為1200bp的基因，在DNA水平上判斷基因敲除是否成功所采用的方法是 DNA分子雜交技術(shù)DNA分子雜交技術(shù)，基因敲除成功的判斷依據(jù)是 出現(xiàn)雜交帶出現(xiàn)雜交帶。
（5）某種蛋白酶可高效降解羽毛中的角蛋白。科研人員將該蛋白酶基因插入到CRISPR/Cas9質(zhì)粒中獲得重組質(zhì)粒，隨后將其導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞，通過基因編輯把該蛋白酶基因插入到基因組DNA中，構(gòu)建得到能大量分泌該蛋白酶的工程菌。據(jù)圖簡述CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞內(nèi)，將該蛋白酶基因插入到基因組DNA的編輯過程：CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是SgRNA，表達(dá)的產(chǎn)物是Cas9蛋白，二者形成復(fù)合體，該復(fù)合體中的SgRNA可識別并與目標(biāo)DNA序列特異性結(jié)合，從而插入到基因組DNA中CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是SgRNA，表達(dá)的產(chǎn)物是Cas9蛋白，二者形成復(fù)合體，該復(fù)合體中的SgRNA可識別并與目標(biāo)DNA序列特異性結(jié)合，從而插入到基因組DNA中。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA連接酶；感受態(tài)細(xì)胞法；堿基互補(bǔ)配對原則；目標(biāo)DNA特定的核苷酸；DNA分子雜交技術(shù)；出現(xiàn)雜交帶；CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是SgRNA，表達(dá)的產(chǎn)物是Cas9蛋白，二者形成復(fù)合體，該復(fù)合體中的SgRNA可識別并與目標(biāo)DNA序列特異性結(jié)合，從而插入到基因組DNA中
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：277引用：2難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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