為探究煙臺黑豬SLA-2抗原的呈遞規(guī)律研究者構(gòu)建了SLA-2基因的表達載體并將其在改造后的豬腎上皮細胞（sT2細胞）中表達。PCR擴增目的基因的反應(yīng)體系為：煙臺黑豬的基因組、引物A和B、DNA聚合酶、緩沖液和dNTP等；操作流程為：①95℃預(yù)處理3 min→②95℃保溫30 s→③66℃保溫30 s→④72℃保溫1 min→⑤操作②-③-④循環(huán)35次→⑥保溫10 min。構(gòu)建基因表達載體所用的質(zhì)粒中，含有的限制酶識別序列如下表所示。

限制酶	EcoRⅠ	NotⅠ	NheⅠ	XbaⅠ	BamHⅠ
識別序列	5'-GAATTC-3'	5'-GCGGCCGC-3'	5'-GCTAGC-3'	5'-TCTAGA-3'	5'-GGATCC-3'

（1）設(shè)計引物時，在引物A和B的一端分別添加了TCTAGA和GCGGCCGC序列，其目的是

能夠使限制酶切割目的基因，以便于和質(zhì)粒連接

能夠使限制酶切割目的基因，以便于和質(zhì)粒連接

，加入的位置是引物的

5'端

5'端

（填“3'端”或“5'端”）PCR操作流程中步驟②的目的是

使DNA分子高溫變性解旋

使DNA分子高溫變性解旋

，步驟③的目的是

使引物與目的基因通過堿基互補配對結(jié)合

使引物與目的基因通過堿基互補配對結(jié)合

。
（2）構(gòu)建基因表達載體時，應(yīng)選用的限制酶是

XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ

XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ

。
（3）將基因表達載體轉(zhuǎn)染人胚胎上皮細胞，獲得攜帶SLA-2基因和嘌呤霉素抗性基因的病毒表達載體，用后者感染sT2細胞后，再利用含嘌呤霉素培養(yǎng)液篩選出成功導(dǎo)入SLA-2基因的細胞（嘌呤霉素是一種能抑制細胞中蛋白質(zhì)合成的抗生素）。請設(shè)計實驗確定用于篩選的嘌呤霉素溶液最低濃度。（求：寫出簡要思路并預(yù)測結(jié)果）

將未導(dǎo)入外源基因的sT2細胞在一系列濃度梯度嘌呤霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時間后，檢測不同濃度溶液中sT2細胞的存活情況?？梢詺⑺浪屑毎淖畹蜐舛燃礊樗?/div>

將未導(dǎo)入外源基因的sT2細胞在一系列濃度梯度嘌呤霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時間后，檢測不同濃度溶液中sT2細胞的存活情況?？梢詺⑺浪屑毎淖畹蜐舛燃礊樗?/div>