為探究煙臺黑豬SLA-2抗原的呈遞規(guī)律研究者構建了SLA-2基因的表達載體并將其在改造后的豬腎上皮細胞（sT2細胞）中表達。PCR擴增目的基因的反應體系為：煙臺黑豬的基因組、引物A和B、DNA聚合酶、緩沖液和dNTP等；操作流程為：①95℃預處理3 min→②95℃保溫30 s→③66℃保溫30 s→④72℃保溫1 min→⑤操作②-③-④循環(huán)35次→⑥保溫10 min。構建基因表達載體所用的質粒中，含有的限制酶識別序列如下表所示。
| 限制酶 | EcoRⅠ | NotⅠ | NheⅠ | XbaⅠ | BamHⅠ |
| 識別序列 | 5'-GAATTC-3' | 5'-GCGGCCGC-3' | 5'-GCTAGC-3' | 5'-TCTAGA-3' | 5'-GGATCC-3' |
能夠使限制酶切割目的基因，以便于和質粒連接
能夠使限制酶切割目的基因，以便于和質粒連接
，加入的位置是引物的 5'端
5'端
（填“3'端”或“5'端”）PCR操作流程中步驟②的目的是 使DNA分子高溫變性解旋
使DNA分子高溫變性解旋
，步驟③的目的是 使引物與目的基因通過堿基互補配對結合
使引物與目的基因通過堿基互補配對結合
。（2）構建基因表達載體時，應選用的限制酶是
XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ
XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ
。（3）將基因表達載體轉染人胚胎上皮細胞，獲得攜帶SLA-2基因和嘌呤霉素抗性基因的病毒表達載體，用后者感染sT2細胞后，再利用含嘌呤霉素培養(yǎng)液篩選出成功導入SLA-2基因的細胞（嘌呤霉素是一種能抑制細胞中蛋白質合成的抗生素）。請設計實驗確定用于篩選的嘌呤霉素溶液最低濃度。（求：寫出簡要思路并預測結果）
將未導入外源基因的sT2細胞在一系列濃度梯度嘌呤霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時間后，檢測不同濃度溶液中sT2細胞的存活情況?？梢詺⑺浪屑毎淖畹蜐舛燃礊樗?/div>
將未導入外源基因的sT2細胞在一系列濃度梯度嘌呤霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時間后，檢測不同濃度溶液中sT2細胞的存活情況。可以殺死所有細胞的最低濃度即為所需
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】能夠使限制酶切割目的基因，以便于和質粒連接；5'端；使DNA分子高溫變性解旋；使引物與目的基因通過堿基互補配對結合；XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ；將未導入外源基因的sT2細胞在一系列濃度梯度嘌呤霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時間后，檢測不同濃度溶液中sT2細胞的存活情況。可以殺死所有細胞的最低濃度即為所需
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.7
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2難度：0.6
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