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雞干擾素是一種具有高效和廣譜抗病毒作用的細胞因子，廣泛用于動物領(lǐng)域的抗病毒治療?？蒲腥藛T將雞干擾素基因作為目的基因，構(gòu)建基因表達載體，通過農(nóng)桿菌介導法導入煙草，以獲得抗病毒煙草。如圖為科研人員制備能合成雞干擾素的煙草愈傷組織細胞的流程，①～④表示相關(guān)的操作，兩種限制酶的識別序列及切割位點如表所示。請回答下列問題：
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限制酶 識別序列和切割位點
EcoRⅠ  菁優(yōu)網(wǎng)
BamHⅠ 菁優(yōu)網(wǎng)
（1）步驟①中，利用PCR技術(shù)擴增干擾素基因時，設(shè)計引物序列的主要依據(jù)是
雞干擾素基因兩端的部分核苷酸序列
雞干擾素基因兩端的部分核苷酸序列
。科研人員還在兩種引物的一端分別加上了
GAATTC
GAATTC
和
GGATCC
GGATCC
序列，以便于后續(xù)的剪切和連接。為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建表達載體需用兩種限制酶，選擇的原則是
AC
AC
。
A．Ti質(zhì)粒內(nèi)，每種限制酶只有一個切割位點
B．目的基因編碼蛋白質(zhì)的序列中，每種限制酶只有一個切割位點
C．酶切后，目的基因形成的兩個黏性末端序列不相同
D．酶切后，Ti質(zhì)粒形成的兩個黏性末端序列相同
（2）步驟②所構(gòu)建的基因表達載體中未標注出的必需元件還有
復制原點
復制原點
，步驟③中需先用
Ca2+
Ca2+
處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導入細胞。
（3）步驟④中，科研人員提取愈傷組織細胞的RNA后，先通過
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
獲得DNA，再進行PCR擴增，若最終未能檢測出干擾素基因，其可能原因是
雞干擾素基因未能導入煙草愈傷組織細胞或?qū)霟煵萦鷤M織細胞的雞干擾素基因未能轉(zhuǎn)錄
雞干擾素基因未能導入煙草愈傷組織細胞或?qū)霟煵萦鷤M織細胞的雞干擾素基因未能轉(zhuǎn)錄
。
（4）用煙草花葉病毒對獲得的轉(zhuǎn)基因煙草和普通煙草進行接種實驗，接種后第19天對照組植株進入病情指數(shù)（植物受病毒侵染的嚴重程度）為100的平臺期，而轉(zhuǎn)基因植株在第
22
22
天才進入平臺期，但此時的病情指數(shù)為79．說明轉(zhuǎn)基因煙草植株對病毒的侵染表現(xiàn)出一定的抗性，但抗性較低，可能的原因有
實驗得到的干擾素表達量較低，未能很好啟動機體產(chǎn)生抗性或病毒接種量過大，相對來說干擾素誘導調(diào)控作用滯后或植物體內(nèi)缺乏干擾素受體，導致外源基因表達的干擾素誘導或調(diào)控作用減弱
實驗得到的干擾素表達量較低，未能很好啟動機體產(chǎn)生抗性或病毒接種量過大，相對來說干擾素誘導調(diào)控作用滯后或植物體內(nèi)缺乏干擾素受體，導致外源基因表達的干擾素誘導或調(diào)控作用減弱
。
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【答案】雞干擾素基因兩端的部分核苷酸序列；GAATTC；GGATCC；AC；復制原點；Ca2+；逆轉(zhuǎn)錄；雞干擾素基因未能導入煙草愈傷組織細胞或?qū)霟煵萦鷤M織細胞的雞干擾素基因未能轉(zhuǎn)錄；22；實驗得到的干擾素表達量較低，未能很好啟動機體產(chǎn)生抗性或病毒接種量過大，相對來說干擾素誘導調(diào)控作用滯后或植物體內(nèi)缺乏干擾素受體，導致外源基因表達的干擾素誘導或調(diào)控作用減弱
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：230引用：3難度：0.3
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  • 1．胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲蛋白酶活性，阻礙昆蟲消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無細胞壁的單細胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長的新型生物反應(yīng)器。研究人員利用基因工程技術(shù)構(gòu)建TI基因的表達載體，并將其導入鹽藻細胞中，進行了一系列實驗?；卮鹣铝袉栴}：
    （1）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地擴增目的基因的前提是需要
     
    ，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關(guān)重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了
     
    。
    （2）獲取目的基因后，為了構(gòu)建基因表達載體，還需要使用的酶是
     
    （答出2種）。構(gòu)建成功的基因表達載體應(yīng)含有的結(jié)構(gòu)有目的基因、啟動子、
     
    （答出3種）等結(jié)構(gòu)。
    （3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細胞后進行了檢測，相關(guān)步驟和實驗結(jié)果如表所示。該檢測方法依據(jù)的原理是
     
    。據(jù)表分析，該實驗結(jié)果說明
     
    。
    組別 實驗步驟 實驗結(jié)果
    ① ② ③
    轉(zhuǎn)基因鹽藻（A組） 離心收集三組細
    胞制備可溶性蛋
    白質(zhì)樣品    		 將TI注射到大白
    兔體內(nèi)，獲取TI
    抗體    		 讓TI抗體和樣品
    進行混合檢測    		 有雜交帶
    非轉(zhuǎn)基因鹽藻（B組） 無雜交帶
    陽性對照組（C組） 有雜交帶

    發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

  • 菁優(yōu)網(wǎng)2．圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列。回答下列問題。
    表1
    pU702pZHZ8
    BglI5.7kb6.7kb
    表2
    固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） 0 1 2 5 10
    不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 +++++ +++ + - -
    +表示生長；-表示不生長。
    （1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的
     
    斷裂，切割形成的末端有
     
    兩種。
    （2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
     
    kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是
     
    。
    （3）導入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成
     
    過程。
    （4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在
     
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    。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細胞的
     
    （填“DNA”或“RNA”），檢測方法應(yīng)采用
     
    技術(shù)。

    發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

  • 3．我國科學家利用蘇云金桿菌中的Bt基因培育出轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，下列說法錯誤的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7
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