DNA分子雜交時，常需要大量的單鏈DNA探針。不對稱PCR是一種常見的單鏈DNA探針制備方法，其原理是反應體系中加入一對數(shù)量不相等的引物。在PCR反應的早期10-15個循環(huán)中，擴增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA，當后期數(shù)量較少的限制性引物耗盡后，數(shù)量較多的非限制性引物將引導合成大量目標DNA單鏈。
（1）若A鏈為所需的DNA分子探針，則非限制性引物應選用引物 ⅣⅣ；PCR反應緩沖體系中一般要添加 Mg2+Mg2+以激活耐高溫的DNA聚合酶。
（2）進行最初10-15個循環(huán)的目的是 增加模板DNA的量增加模板DNA的量。如果體系中原模板DNA的數(shù)量為a,最初10次循環(huán)產(chǎn)物為雙鏈，后15次循環(huán)產(chǎn)物為單鏈，則最終獲得的單鏈探針數(shù)為 15×210?a15×210?a。因為DNA單鏈與雙鏈的分子量不同，可通過 （瓊脂糖凝膠）電泳（瓊脂糖凝膠）電泳將單鏈探針DNA分離出米。
（3）為精確控制產(chǎn)物生成量，科學家嘗試設(shè)計了較長的非限制性引物與較短的限制性引物，在進行一定的循環(huán)次數(shù)后，適當提高復性溫度以避免殘留限制性引物與模板結(jié)合。高復性溫度條件下限制性引物不能結(jié)合模板鏈的原因是 引物越短，復性時可與模板鏈形成的氫鍵數(shù)越少，越容易被高溫破壞引物越短，復性時可與模板鏈形成的氫鍵數(shù)越少，越容易被高溫破壞。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】Ⅳ；Mg2+；增加模板DNA的量；15×210?a；（瓊脂糖凝膠）電泳；引物越短，復性時可與模板鏈形成的氫鍵數(shù)越少，越容易被高溫破壞
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/9/9 0:0:8組卷：7引用：2難度：0.6
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1．科學家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）?？衫枚c突變的DNA構(gòu)建基因表達載體，常用將基因表達載體導入植物細胞，還需用到植物細胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴增，若將一個目的基因復制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細胞內(nèi)，并在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程稱為?？蒲腥藛T通過實驗研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學家利用生物技術(shù)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫芫训募毎酥校?jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測外源基因在小鼠細胞內(nèi)是否成功表達
C．人的生長激素基因能在小鼠細胞表達，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細胞進行核移植（克隆），可以獲得多個具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
2．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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