甘藍型油菜中，抑制PEP基因的表達可提高油菜籽的含油量。通過基因工程將PEP基因反向連接在啟動子后，構(gòu)建轉(zhuǎn)反義PEP基因油菜是提高油菜籽含油量的常用技術(shù)路徑。請回答下列問題：
（1）為將PEP基因反向連接在啟動子后，構(gòu)建反義PEP基因，需要將限制酶切位點設(shè)計在引物上，PEP基因的上游引物和下游引物中應(yīng)分別引入 ScaⅠ、HamHⅠScaⅠ、HamHⅠ酶切位點。
（2）用激光照射油菜愈傷組織時，可在細胞膜上打出一個穿孔，轉(zhuǎn)反義PEP基因表達載體由此小孔進入油菜細胞，幾秒種后小孔封閉，該過程體現(xiàn)了細胞膜具有 流動性流動性。目的基因表達載體進入細胞后，Ti質(zhì)粒上的 T-DNAT-DNA區(qū)段可轉(zhuǎn)移到油菜細胞的基因組中。
（3）篩選時，需在油菜愈傷組織培養(yǎng)基中加入 新霉素新霉素進行初步選擇。在激光照射下，存活的細胞一般會發(fā)出 綠色熒光綠色熒光。為檢測反義PEP基因是否整合到染色體上，研究者通常用檢測細胞中是否存在ntp基因，而不檢測PEP基因。不直接檢測PEP基因的原因是 油菜細胞的基因組中本身有PEP基因油菜細胞的基因組中本身有PEP基因。
（4）已知PEP基因的轉(zhuǎn)錄模板鏈為A鏈，則反義PEP基因的轉(zhuǎn)錄模板為 B鏈B鏈。轉(zhuǎn)反義PEP基因油菜中PEP基因的表達受阻，原因是 以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈，抑制了PEP基因的表達以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈，抑制了PEP基因的表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】ScaⅠ、HamHⅠ；流動性；T-DNA；新霉素；綠色熒光；油菜細胞的基因組中本身有PEP基因；B鏈；以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈，抑制了PEP基因的表達
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：3難度：0.7
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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