甘藍型油菜中，抑制PEP基因的表達可提高油菜籽的含油量。通過基因工程將PEP基因反向連接在啟動子后，構(gòu)建轉(zhuǎn)反義PEP基因油菜是提高油菜籽含油量的常用技術(shù)路徑。請回答下列問題：
（1）為將PEP基因反向連接在啟動子后，構(gòu)建反義PEP基因，需要將限制酶切位點設(shè)計在引物上，PEP基因的上游引物和下游引物中應(yīng)分別引入 ScaⅠ、HamHⅠScaⅠ、HamHⅠ酶切位點。
（2）用激光照射油菜愈傷組織時，可在細胞膜上打出一個穿孔，轉(zhuǎn)反義PEP基因表達載體由此小孔進入油菜細胞，幾秒種后小孔封閉，該過程體現(xiàn)了細胞膜具有 流動性流動性。目的基因表達載體進入細胞后，Ti質(zhì)粒上的 T-DNAT-DNA區(qū)段可轉(zhuǎn)移到油菜細胞的基因組中。
（3）篩選時，需在油菜愈傷組織培養(yǎng)基中加入 新霉素新霉素進行初步選擇。在激光照射下，存活的細胞一般會發(fā)出 綠色熒光綠色熒光。為檢測反義PEP基因是否整合到染色體上，研究者通常用檢測細胞中是否存在ntp基因，而不檢測PEP基因。不直接檢測PEP基因的原因是 油菜細胞的基因組中本身有PEP基因油菜細胞的基因組中本身有PEP基因。
（4）已知PEP基因的轉(zhuǎn)錄模板鏈為A鏈，則反義PEP基因的轉(zhuǎn)錄模板為 B鏈B鏈。轉(zhuǎn)反義PEP基因油菜中PEP基因的表達受阻，原因是 以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈，抑制了PEP基因的表達以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈，抑制了PEP基因的表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】ScaⅠ、HamHⅠ；流動性；T-DNA；新霉素；綠色熒光；油菜細胞的基因組中本身有PEP基因；B鏈；以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈，抑制了PEP基因的表達
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：3難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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