Lon1蛋白酶具有降解葉綠體和線粒體內(nèi)氧化蛋白、維持細胞正常代謝的功能。為揭示控制Lon1蛋白酶表達的藍莓VcLon1基因的生物學功能，并為其他植物抗旱機制研究提供基礎(chǔ)信息?？蒲泄ぷ髡咄ㄟ^獲得轉(zhuǎn)基因本氏煙植株來進行干旱生理分析?；卮鹣铝袉栴}：

（1）為獲得VcLon1基因，科研人員用藍莓基因組DNA為模版，根據(jù)

VcLon1 基因的核苷酸序列

VcLon1 基因的核苷酸序列

設計引物進行PCR擴增。PCR擴增的原理是

DNA的復制

DNA的復制

。在進行①過程時，選用兩種酶同時切割是為了防止一種酶切割時造成

目的基因與載體反向連接/自身連接

目的基因與載體反向連接/自身連接

。
（2）在進行③過程時，需要用酒精溶液和

次氯酸鈉（或氯化汞）

次氯酸鈉（或氯化汞）

溶液進行消毒，最后使用無菌水清洗。在④過程中使用的培養(yǎng)基中需加入一定量的蔗糖，作用是

提供碳源，維持培養(yǎng)基的滲透壓

提供碳源，維持培養(yǎng)基的滲透壓

（答出2點即可）。
（3）在⑤過程中，將本氏煙細胞與農(nóng)桿菌混合后共培養(yǎng)，旨在讓目的基因進入本氏煙細胞，影響該過程成功的因素，除溫度等環(huán)境因素外，還可能是

共培養(yǎng)時間；農(nóng)桿菌的種類和活性等；受體細胞的生理狀態(tài)等

共培養(yǎng)時間；農(nóng)桿菌的種類和活性等；受體細胞的生理狀態(tài)等

（答出2點即可）。除了本實驗采用的方法，還可采用

電擊法、基因槍法、花粉管通道法等

電擊法、基因槍法、花粉管通道法等

法將VcLon1基因?qū)胫参锸荏w細胞。
（4）在⑦過程中，試管苗需要移栽至適宜的光照和溫度下，并逐漸

降低

降低

濕度進行適應鍛煉后方可移栽至自然環(huán)境中種植。
（5）科研人員經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因煙草植株1-10中

3

3

號植株未成功導入外源基因VcLon1，而WT植株則不能擴增出2982bp條帶。隨后利用了半定量PCR分析外源基因VcLon1在本氏煙中的表達，其結(jié)果如圖2，因此后續(xù)可取

1、2、4、6-9

1、2、4、6-9

號轉(zhuǎn)基因本氏煙植株作為干旱生理分析的試驗材料。