IKK激酶山IKKα、IKKβ和IKKγ三種亞基組成，該酶參與動物體內(nèi)免疫細胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷（SCID）患兒的IKKβ基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃。為研究該患兒發(fā)病機制，研究人員應用大引物PCR定點誘變技術獲得突變基因，并培育出SCID模型小鼠。圖1為定點誘變獲得突變基因的過程。
（1）在定點誘變獲取突變基因時，PCR1中使用的引物有 引物A、引物C引物A、引物C，PCR中使用的引物有 引物B、大引物b引物B、大引物b。PCR1和PCR2不能在同一個反應體系中進行，原因是 引物之間能結合，會干擾引物和模板鏈的結合，影響PCR過程引物之間能結合，會干擾引物和模板鏈的結合，影響PCR過程。
（2）PCR在第一個循環(huán)之前通常將DNA樣品加熱至95℃數(shù)分鐘進行預變性處理，其目的是 增加大分子模板DNA徹底變性的概率增加大分子模板DNA徹底變性的概率。由于大引物較長，含C與G的堿基較多，為減少非目標基因的獲得，在PCR2復性過程中應采取的措施是 適當提高退火溫度適當提高退火溫度。
（3）培育模型鼠的過程中，需用限制酶SacI、HindⅢ對突變基因和載體進行雙酶切，雙酶切的優(yōu)點是 防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接。研究人員經(jīng)鑒定、篩選獲得一只轉基因雜合鼠HE，讓HE與野生鼠雜交得F1，F(xiàn)1雌雄鼠隨機交配得F2。對F2中純合野生鼠WT、純合突變鼠HO、雜合鼠HE三種小鼠胸腺淋巴細胞中組成IKK激酶的三種亞基進行提純和電泳，結果如圖2。據(jù)此結果推測SCID患者免疫缺陷產(chǎn)生的機制是 IKKβ基因突變導致IKKβ含量減少，IKK激酶活力降低，不利于免疫細胞的分化IKKβ基因突變導致IKKβ含量減少，IKK激酶活力降低，不利于免疫細胞的分化。
【答案】引物A、引物C；引物B、大引物b；引物之間能結合，會干擾引物和模板鏈的結合，影響PCR過程；增加大分子模板DNA徹底變性的概率；適當提高退火溫度；防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接；IKKβ基因突變導致IKKβ含量減少，IKK激酶活力降低，不利于免疫細胞的分化
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/13 8:0:8組卷：32引用：3難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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