某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過(guò)程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對(duì)N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。N蛋白胞外段單克隆抗體制備流程如圖1：
（1）用N蛋白胞外段作為抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫后，取小鼠腺組織用
機(jī)械
機(jī)械
方法或 胰蛋白
胰蛋白
酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有 95%空氣和5%的CO2
95%空氣和5%的CO2
氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。
（2）用選擇性培養(yǎng)基對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行 克隆化
克隆化
培養(yǎng)。用 抗原一抗體雜交
抗原一抗體雜交
技術(shù)檢測(cè)每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集 細(xì)胞培養(yǎng)液
細(xì)胞培養(yǎng)液
，提取單克隆抗體。
（3）利用上述流程制備的N蛋白胞外段抗體能準(zhǔn)確識(shí)別 抗原
抗原
的細(xì)微差異，與之發(fā)生特異性結(jié)合，并可 大量制備
大量制備
，因此被廣泛用作診斷試劑。
（4）利用小鼠制備的抗體是鼠源抗體，鼠源抗體具有外源性，會(huì)被人體免疫系統(tǒng)當(dāng)作抗原而清除（稱為人抗鼠抗體反應(yīng)即HAMA反應(yīng)）?？贵w結(jié)構(gòu)示意圖如圖2，引起HAMA反應(yīng)的主要是“C區(qū)”，通過(guò)制備人鼠嵌合抗體可以解決HAMA反應(yīng)?，F(xiàn)利用重組DNA技術(shù)可以制備人鼠嵌合抗體，請(qǐng)寫出簡(jiǎn)要制備思路：將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中，并構(gòu)建基因表達(dá)載體，利用顯微注射技術(shù)將表達(dá)載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，表達(dá)出嵌合抗體
將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中，并構(gòu)建基因表達(dá)載體，利用顯微注射技術(shù)將表達(dá)載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，表達(dá)出嵌合抗體
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（5）為了進(jìn)一步減少免疫排斥反應(yīng)，科學(xué)家利用噬菌體展示庫(kù)技術(shù)生產(chǎn)出全人源化單抗（單抗成分全部由人的基因編碼）。具體操作如下，用PCR技術(shù)從生物體內(nèi)擴(kuò)增出整套編碼人抗體的基因序列，克隆到噬菌體載體上，并以融合蛋白的形式表達(dá)到噬菌體表面，從而可以方便地對(duì)抗體進(jìn)行篩選、擴(kuò)增。但是利用這種方法制備的抗體結(jié)構(gòu)準(zhǔn)確程度下降，原因是 抗體是在原核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，原核生物不能對(duì)真核生物的復(fù)雜蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確加工
抗體是在原核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，原核生物不能對(duì)真核生物的復(fù)雜蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確加工
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