圖中甲表示含目的基因的DNA片段，圖乙表示質(zhì)粒（已知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三種限制酶切割后產(chǎn)生的黏性末端都不相同）。請回答下列問題：
（1）已知DNA的合成方向總是從子鏈的5′端向3′端延伸。利用PCR技術(shù)以圖甲中的DNA片段為模板擴(kuò)增目的基因，需要的引物有 B、CB、C（從A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選擇）。利用PCR擴(kuò)增目的基因的過程由高溫變性（0～95℃），低溫復(fù)性（55～60℃），適溫延伸（70～75℃）三個(gè)步驟構(gòu)成一個(gè)循環(huán)，為使得DNA聚合酶能夠重復(fù)利用，選用的酶應(yīng)在 90～9590～95℃處理后仍然具備催化活性。
（2）要保證目的基因能與圖乙中的質(zhì)粒準(zhǔn)接，要將（1）中選出的兩種引物的5′端分別添加 PstⅠPstⅠ和 EcoRⅠEcoRⅠ兩種限制酶的識別序列。在此基礎(chǔ)上，對擴(kuò)增的目的基因和質(zhì)粒都用這兩種限制酶處理，待基因表達(dá)載體構(gòu)建完成后，加入含大腸桿菌的轉(zhuǎn)化液中。要從中分離出含該重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，請簡述操作思路：將轉(zhuǎn)化液接種在加入四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，觀察是否有菌落生長將轉(zhuǎn)化液接種在加入四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，觀察是否有菌落生長。
（3）從DNA分子結(jié)構(gòu)分析，上述操作用到的工具酶包括 限制酶限制酶和 DNA連接酶DNA連接酶，其作用的共同點(diǎn)是都可以作用于DNA分子的 磷酸二酯磷酸二酯鍵。
（4）若要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，則一般先要用Ca2+處理大腸桿菌，目的是使大腸桿菌處于一種 吸收周圍環(huán)境中DNA分子吸收周圍環(huán)境中DNA分子生理狀態(tài)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】B、C；90～95；PstⅠ；EcoRⅠ；將轉(zhuǎn)化液接種在加入四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，觀察是否有菌落生長；限制酶；DNA連接酶；磷酸二酯；吸收周圍環(huán)境中DNA分子
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：28引用：2難度：0.6
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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