科研人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將抗除草劑基因?qū)敫仕{(lán)，過(guò)程如圖1所示，①～④為操作步驟，BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ酶切位點(diǎn)唯一，識(shí)別序列和切割位點(diǎn)見(jiàn)表。

限制酶	識(shí)別序列和切割位點(diǎn)
BamHⅠ	-G↓GATCC-
Bg1Ⅱ	-A↓GATCT-
EcoRⅠ	-G↓AATTC-

（1）步驟①為

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

，其目的是

使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用

使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用

。
（2）若目的基因用BamHⅠ和BglⅡ剪切，質(zhì)粒用BamHⅠ剪切，剪切后的目的基因和質(zhì)粒能連接在一起，原因是

BamHI和BglⅡ切割DNA后產(chǎn)生相同的黏性末端

BamHI和BglⅡ切割DNA后產(chǎn)生相同的黏性末端

。酶切后的目的基因存在正向與反向兩種連接方式，可用

BamHI和EcoRI

BamHI和EcoRI

酶對(duì)兩種重組質(zhì)粒進(jìn)行剪切，通過(guò)凝膠電泳分析產(chǎn)物大小進(jìn)行區(qū)分，如圖2所示，圖中

樣品2

樣品2

（樣品1/樣品2）為所需基因表達(dá)載體。
（3）步驟②用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理農(nóng)桿菌后獲得容易吸收周圍環(huán)境中DNA分子狀態(tài)的細(xì)胞，以便將重組質(zhì)粒導(dǎo)入。步驟③將農(nóng)桿菌與甘藍(lán)愈傷組織共同培養(yǎng)后，在步驟④的培養(yǎng)基中添加

潮霉素

潮霉素

以便篩選出含目的基因的甘藍(lán)植株。若要檢測(cè)甘藍(lán)是否具有抗除草劑的性狀，需要在個(gè)體水平進(jìn)行鑒定，方法是

噴灑適宜濃度的除草劑

噴灑適宜濃度的除草劑

。