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試題詳情
科研人員通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出超量表達(dá)P蛋白的轉(zhuǎn)基因甜玉米。在超量表達(dá)P基因載體的構(gòu)建中,含P基因的DNA片段以及Ti質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)如圖所示,其中強(qiáng)啟動(dòng)子能驅(qū)動(dòng)基因的持續(xù)轉(zhuǎn)錄。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
(1)以RNA為模板,通過(guò)RT-PCR技術(shù)可獲取P基因。進(jìn)行RT-PCR時(shí)一般要加入4種脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)而不是脫氧核苷酸,其原因是 dNTP能為子鏈延伸過(guò)程提供能量和原料dNTP能為子鏈延伸過(guò)程提供能量和原料,同時(shí)需加入的酶有了特異性擴(kuò)增P基因序列,需根據(jù) P基因兩端的堿基序列P基因兩端的堿基序列設(shè)計(jì)特異性引物。
(2)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),應(yīng)優(yōu)先選用的限制酶是 BamHIBamHI和 SacISacI這樣操作不僅使P基因在玉米植株中超量表達(dá),還可利用T-DNA的 可轉(zhuǎn)移可轉(zhuǎn)移特性,最終使P基因 整合到玉米細(xì)胞染色體上整合到玉米細(xì)胞染色體上。
(3)對(duì)轉(zhuǎn)基因再生玉米植株進(jìn)行鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn),有些植株雖有P基因,但幾乎沒(méi)有P蛋白,造成該現(xiàn)象的原因可能有 基因轉(zhuǎn)化過(guò)程中強(qiáng)啟動(dòng)子可能丟失或斷裂,未能真正轉(zhuǎn)化成功;雖然轉(zhuǎn)化成功,但是P基因保持沉默,不能有效表達(dá)基因轉(zhuǎn)化過(guò)程中強(qiáng)啟動(dòng)子可能丟失或斷裂,未能真正轉(zhuǎn)化成功;雖然轉(zhuǎn)化成功,但是P基因保持沉默,不能有效表達(dá)。
限制酶 | 識(shí)別序列 |
ClaⅠ | 5′-AT↓CGAT-3′ |
BamHⅠ | 5′-G↓GATCC-3′ |
HindⅢ | 5′-A↓AGCTT-3′ |
EcoRⅠ | 5′-G↓AATTC-3′ |
KpnⅠ | 5′-GGTAC↓C-3′ |
SacⅠ | 5′-GAGCT↓C-3′ |
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】dNTP能為子鏈延伸過(guò)程提供能量和原料;P基因兩端的堿基序列;BamHI;SacI;可轉(zhuǎn)移;整合到玉米細(xì)胞染色體上;基因轉(zhuǎn)化過(guò)程中強(qiáng)啟動(dòng)子可能丟失或斷裂,未能真正轉(zhuǎn)化成功;雖然轉(zhuǎn)化成功,但是P基因保持沉默,不能有效表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:7引用:1難度:0.5
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