如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡(jiǎn)捷地分析出已知序列兩側(cè)的序列，具體流程如圖（以EcoRⅠ酶切為例）：
請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題：
（1）步驟Ⅰ用的EcoRⅠ是一種
限制性核酸內(nèi)切（或限制）
限制性核酸內(nèi)切（或限制）
酶，它通過(guò)識(shí)別特定的核苷酸序列
核苷酸序列
切割特定位點(diǎn)。
（2）步驟Ⅱ用的DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間的3′-羥基與5′-磷酸間形成磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
；PCR循環(huán)中，升溫到95℃是為了獲得DNA單鏈
DNA單鏈
；Taq DNA聚合酶的作用是催化以DNA為模板的DNA鏈的延伸
以DNA為模板的DNA鏈的延伸
。
（3）若下表所列為已知的DNA序列和設(shè)計(jì)的一些PCR引物，步驟Ⅲ選用的PCR引物必須是②④
②④
（從引物①②③④中選擇，填編號(hào)）。
|
DNA序列（虛線處省略了部分核苷酸序列） |
| 已知序列 |
 |
| PCR引物 |
①5′-AACTATGCGCTCATGA-3′
②5′-GCAATGCGTAGCCTCT-3′
③5′-AGAGGCTACGCATTGC-3′
④5′-TCATGAGCGCATAGTT-3′ |
（4）對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序，經(jīng)分析得到了片段F的完整序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），結(jié)果正確的是
B
B
。
A．5′-AACTATGCG----------AGCCCTT-3′
B．5′-AATTCCATG----------CTGAATT-3′
C．5′-GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′
D．5′-TTGATACGC----------CGAGTAC-3′
