隨著全球轉(zhuǎn)基因作物大規(guī)模種植和全球一體化下頻繁的貿(mào)易流通，轉(zhuǎn)基因監(jiān)管的任務(wù)將越來越重。為了還給消費(fèi)者知情權(quán)和選擇權(quán)，多個(gè)國家和地區(qū)對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品實(shí)行標(biāo)識(shí)管理制度，這些法規(guī)實(shí)施的前提就是要建立穩(wěn)定、準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)。PCR轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)被多國檢測工作者使用，該技術(shù)通常包括核酸提取、核酸擴(kuò)增、擴(kuò)增產(chǎn)物檢測3個(gè)步驟。某研究小組設(shè)計(jì)并完成了“轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆定性PCR檢測”實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)參與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)并回答相關(guān)問題（草甘膦為常用除草劑；轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆的外源基因構(gòu)建圖如圖1所示）：
（1）提取DNA：取待測大豆組織裂解破碎，進(jìn)行DNA提取和純化，得到待測大豆基因組DNA。該過程的常用的試劑有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是
溶解DNA
溶解DNA
，提取到的DNA可以用 二苯胺
二苯胺
試劑鑒定。
（2）DNA擴(kuò)增：
①在確定擴(kuò)增對(duì)象后，從 序列數(shù)據(jù)庫
序列數(shù)據(jù)庫
中獲得待擴(kuò)增基因序列，以此為依據(jù)可設(shè)計(jì)引物。該小組擬定的引物設(shè)計(jì)如表所示，其引物設(shè)計(jì)有一個(gè)是不科學(xué)的，請(qǐng)指出并說明原因 CaMV35S的引物設(shè)計(jì)不科學(xué)，原因是引物太短、特異性弱，并且兩個(gè)引物之間會(huì)互補(bǔ)結(jié)合
CaMV35S的引物設(shè)計(jì)不科學(xué)，原因是引物太短、特異性弱，并且兩個(gè)引物之間會(huì)互補(bǔ)結(jié)合
。
| 基因 |
引物序列 |
產(chǎn)物片段大小 |
基因來源 |
| Lectin |
F-5'GCC CTC TAC TCC ACC CCC ATC C-3'
R-5'GCC CAT CTG CAA GCC TTT TTG TG-3' |
118 |
內(nèi)源基因 |
| CaMV35S |
F-5'GGG ATT-3'
R-5'AAT CCC-3' |
195 |
外源基因 |
| NOS |
F-5'GAA TCC TGT TGC CGG TCT TG-3'
R-5'TTA TCC TAG TTT GCG CGC TA-3' |
180 |
外源基因 |
| CP4-EPSPS |
F-5'CTT CTG TGC TGT AGC CAC TGA TGC-3
R-5'CCA CTA TCC TTC GCA AGA CCC TTC-3 |
320 |
外源基因 |
注：內(nèi)源基因指大豆基因組內(nèi)基因，外源基因指大豆基因組外基因。
②PCR擴(kuò)增：在4個(gè)反應(yīng)體系中分別加入
待測大豆基因組DNA
待測大豆基因組DNA
（模板）、相應(yīng)引物、
Taq
Taq
酶、
4種脫氧核苷酸
4種脫氧核苷酸
等，并將PCR儀的溫度設(shè)定為：變性94℃30s、復(fù)性58℃30s、延伸72℃40s,循環(huán)30次?！把由臁钡臏囟仍O(shè)定為72℃，是因?yàn)樵摐囟认?
Taq酶活性較高
Taq酶活性較高
。在設(shè)定的PCR體系下可以特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段，主要是因?yàn)?
引物與模板DNA的結(jié)合
引物與模板DNA的結(jié)合
具有特異性。
（3）擴(kuò)增產(chǎn)物檢測：可采用
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
的方法檢測。部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2、3所示。據(jù)圖2初步判斷，該大豆為
非轉(zhuǎn)基因
非轉(zhuǎn)基因
（填“轉(zhuǎn)基因”或“非轉(zhuǎn)基因”）大豆。據(jù)圖2、圖3分析，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果是
不可信的
不可信的
（填“可信的”或“不可信的”）。
