為研究干旱脅迫基因LEA和VOC對甘藍型油菜油脂的積累機制，科研人員構建了兩個基因表達載體。其中基因LEA與熒光素酶基因（Luc）構建成基因表達載體甲，基因VOC和標記基因構建成基因表達載體乙，相關序列及酶切位點如圖1所示。

（1）利用PCR擴增LEA基因時，需要在引物的

5′端

5′端

（填“3′端”或“5′端”）添加限制酶識別序列，添加序列對應的限制酶是

EcoRⅤ和XbaⅠ

EcoRⅤ和XbaⅠ

，選擇上述酶的依據(jù)是

Luc中存在BamHⅠ識別序列，BamHⅠ會將Luc切斷；一種酶切會導致載體、LEA自身環(huán)化及LEA反向連接

Luc中存在BamHⅠ識別序列，BamHⅠ會將Luc切斷；一種酶切會導致載體、LEA自身環(huán)化及LEA反向連接

。
（2）為了構建基因表達載體甲，依據(jù)圖中已知堿基序列，在PCR擴增儀中加入的引物的堿基序列為

5'-GATATCATGGGC-3'和5'-TCTAGACTAGTG-3'

5'-GATATCATGGGC-3'和5'-TCTAGACTAGTG-3'

，擴增

4

4

代后會得到等長的8條DNA片段。
（3）乙酰-CoA羧化酶基因（AC）是油脂合成過程的關鍵酶基因，甘油三酯酯酶基因（ATGL）是油脂分解過程的關鍵酶基因。將基因表達載體甲、乙分別導入植物細胞培養(yǎng)成轉基因植物A、B，在干旱脅迫的環(huán)境下培養(yǎng)兩種轉基因植物和正常植物，分別檢測植物體內AC和ATGL基因的表達水平，結果如圖2。
①在分子水平上，用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

方法檢測AC酶和ATGL酶的含量可得到上述結果。
②基于以上研究，干旱脅迫基因LEA和VOC在甘藍型油菜油脂積累中的機制是

干旱脅迫的環(huán)境下，LEA通過促進AC的表達使植物油脂增加；VOC通過抑制ATGL的表達減弱油脂的降低

干旱脅迫的環(huán)境下，LEA通過促進AC的表達使植物油脂增加；VOC通過抑制ATGL的表達減弱油脂的降低

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