為了研究低溫誘導(dǎo)對某基因的啟動子P活性的影響，科研人員進(jìn)行了啟動子P的PCR提取、特定表達(dá)載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)基因煙草的功能鑒定。該基因及其啟動子P的結(jié)構(gòu)及相應(yīng)限制酶的切割位點(diǎn)如圖1所示，圖中灰色區(qū)域堿基序列是已知的，啟動子P（圖中黑色區(qū)域）及上游堿基序列未知，片段Ⅰ和片段Ⅱ中的字母A～F均表示引物。請回答下列問題。
（1）啟動子是 RNA聚合酶識別并結(jié)合RNA聚合酶識別并結(jié)合的位點(diǎn)。不能直接根據(jù)片段I擴(kuò)增啟動子P的原因是 啟動子P及左側(cè)的序列未知，無法合成PCR所需要的引物啟動子P及左側(cè)的序列未知，無法合成PCR所需要的引物。
（2）為了能擴(kuò)增正常啟動子P，科研人員先用 酶1和DNA連接酶1和DNA連接酶處理圖中的片段Ⅰ，使片段Ⅰ成為環(huán)狀DNA；再將環(huán)狀DNA用 酶2酶2（填“酶1”或“酶2”）處理得到了片段Ⅱ，如圖2所示。根據(jù)片段Ⅱ能不能擴(kuò)增出啟動子P？若能，請寫出可選用的引物組合（用C、D、E、F表示），若不能請說明理由 能，可選用的引物組合是D和E能，可選用的引物組合是D和E。
（3）已知卡那霉素可抑制煙草細(xì)胞的生長，基因M可在煙草的根部正常表達(dá)，其表達(dá)產(chǎn)物可將X-Gluc水解生成藍(lán)色物質(zhì)。將啟動子P和基因M結(jié)合并與含有卡那霉素抗性基因的Ti-質(zhì)粒重組構(gòu)建基因表達(dá)載體。將表達(dá)載體和酚類物質(zhì)混合后加入含有煙草細(xì)胞的培養(yǎng)基中，酚類物質(zhì)的作用是 吸引農(nóng)桿菌感染煙草細(xì)胞吸引農(nóng)桿菌感染煙草細(xì)胞。再用含有 卡那霉素和X?Gluc卡那霉素和X?Gluc的培養(yǎng)基篩選出所需的煙草細(xì)胞，然后經(jīng)過植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因煙草植株。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】RNA聚合酶識別并結(jié)合；啟動子P及左側(cè)的序列未知，無法合成PCR所需要的引物；酶1和DNA連接；酶2；能，可選用的引物組合是D和E；吸引農(nóng)桿菌感染煙草細(xì)胞；卡那霉素和X?Gluc
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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