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為了研究低溫誘導對某基因的啟動子P活性的影響，科研人員進行了啟動子P的PCR提取、特定表達載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)基因煙草的功能鑒定。該基因及其啟動子P的結(jié)構(gòu)及相應限制酶的切割位點如圖1所示，圖中灰色區(qū)域堿基序列是已知的，啟動子P（圖中黑色區(qū)域）及上游堿基序列未知，片段Ⅰ和片段Ⅱ中的字母A～F均表示引物。請回答下列問題。
菁優(yōu)網(wǎng)
（1）啟動子是
RNA聚合酶識別并結(jié)合
RNA聚合酶識別并結(jié)合
的位點。不能直接根據(jù)片段I擴增啟動子P的原因是
啟動子P及左側(cè)的序列未知，無法合成PCR所需要的引物
啟動子P及左側(cè)的序列未知，無法合成PCR所需要的引物
。
（2）為了能擴增正常啟動子P，科研人員先用
酶1和DNA連接
酶1和DNA連接
酶處理圖中的片段Ⅰ，使片段Ⅰ成為環(huán)狀DNA；再將環(huán)狀DNA用
酶2
酶2
（填“酶1”或“酶2”）處理得到了片段Ⅱ，如圖2所示。根據(jù)片段Ⅱ能不能擴增出啟動子P？若能，請寫出可選用的引物組合（用C、D、E、F表示），若不能請說明理由
能，可選用的引物組合是D和E
能，可選用的引物組合是D和E
。
（3）已知卡那霉素可抑制煙草細胞的生長，基因M可在煙草的根部正常表達，其表達產(chǎn)物可將X-Gluc水解生成藍色物質(zhì)。將啟動子P和基因M結(jié)合并與含有卡那霉素抗性基因的Ti-質(zhì)粒重組構(gòu)建基因表達載體。將表達載體和酚類物質(zhì)混合后加入含有煙草細胞的培養(yǎng)基中，酚類物質(zhì)的作用是
吸引農(nóng)桿菌感染煙草細胞
吸引農(nóng)桿菌感染煙草細胞
。再用含有
卡那霉素和X?Gluc
卡那霉素和X?Gluc
的培養(yǎng)基篩選出所需的煙草細胞，然后經(jīng)過植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因煙草植株。

【答案】RNA聚合酶識別并結(jié)合；啟動子P及左側(cè)的序列未知，無法合成PCR所需要的引物；酶1和DNA連接；酶2；能，可選用的引物組合是D和E；吸引農(nóng)桿菌感染煙草細胞；卡那霉素和X?Gluc
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：1難度：0.5
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  • 1．運用現(xiàn)代生物技術(shù)的育種方法，將抗菜青蟲的Bt基因轉(zhuǎn)移到優(yōu)質(zhì)油菜中，培育出轉(zhuǎn)基因抗蟲的油菜品種，這一品種在生長過程中能產(chǎn)生特異的殺蟲蛋白質(zhì)，對菜青蟲有顯著抗性，能大大減輕菜青蟲對油菜的危害，提高油菜產(chǎn)量，減少農(nóng)藥使用，據(jù)以上信息，下列敘述正確的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/7 11:0:1組卷：104引用：32難度：0.7

  • 菁優(yōu)網(wǎng)2．圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列?；卮鹣铝袉栴}。
    表1
    pU702pZHZ8
    BglI5.7kb6.7kb
    表2
    固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） 0 1 2 5 10
    不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 +++++ +++ + - -
    +表示生長；-表示不生長。
    （1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的
     
    斷裂，切割形成的末端有
     
    兩種。
    （2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
     
    kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是
     
    。
    （3）導入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成
     
    過程。
    （4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應在
     
    μg/mL以上，挑選成功導入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
     
    。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細胞的
     
    （填“DNA”或“RNA”），檢測方法應采用
     
    技術(shù)。

    發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

  • 3．在碳反應中，RuBP羧化酶（R酶）可以催化CO2的固定，R酶由大亞基蛋白（L）和小亞基蛋白（S）組成。高等植物細胞中L由葉綠體基因編碼并在葉綠體中合成，S由細胞核基因編碼并在細胞溶膠中的核糖體合成后進入葉綠體，與L組裝成有功能的酶。研究發(fā)現(xiàn)，原核生物藍藻（藍細菌）R酶的活性高于高等植物。研究人員將藍藻S、L基因轉(zhuǎn)入某高等植物（甲）的葉綠體DNA中，同時去除甲的L基因。轉(zhuǎn)基因植株能夠存活生長。檢測結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因植株中的R酶活性高于未轉(zhuǎn)基因的正常植株。下列有關(guān)敘述正確的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/7 8:0:2組卷：5引用：1難度：0.5
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