枸杞子是應(yīng)用極為廣泛的一種中藥飲片，李時(shí)珍在《本草綱目》中把枸杞子的主要功效為“滋腎、潤肺、明目”，又曰“久服，堅(jiān)筋骨，輕身不老，耐寒暑”。我國對(duì)中藥飲片中的微生物含量有明確規(guī)定，為調(diào)查某家藥店在售枸杞子的耐熱菌（100℃較短時(shí)間處理細(xì)菌中芽孢和孢子不會(huì)死亡）污染情況，進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：
步驟一：取枸杞子樣品25g,加入適量的pH為7.0的氯化鈉蛋白胨緩沖液獲得樣品溶液，用無菌紗布過濾制備成待測(cè)液250mL。
步驟二：對(duì)待測(cè)液進(jìn)行

沸水浴（100℃加熱處理）

沸水?。?00℃加熱處理）

較短的一段時(shí)間。
步驟三：快速冷卻后取待測(cè)液10mL以10倍梯度依次稀釋4次，各取0.1mL溶液涂布接種于4個(gè)胰酪大豆胨平板上，培養(yǎng)72h。
步驟四：觀察并進(jìn)行計(jì)數(shù)。
回答問題：
（1）微生物計(jì)數(shù)的常用方法有

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法）

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法）

、

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

，其中后者的測(cè)量值比實(shí)際值偏小，因?yàn)?

當(dāng)兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞（細(xì)菌或真菌）連在一起時(shí)，培養(yǎng)基上觀察到的只是一個(gè)菌落（培養(yǎng)基上有個(gè)別的菌落不是單個(gè)的菌落/不是單菌落/不是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來）

當(dāng)兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞（細(xì)菌或真菌）連在一起時(shí)，培養(yǎng)基上觀察到的只是一個(gè)菌落（培養(yǎng)基上有個(gè)別的菌落不是單個(gè)的菌落/不是單菌落/不是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來）

。
（2）將步驟二補(bǔ)充完整：

沸水?。?00℃加熱處理）

沸水浴（100℃加熱處理）

。
（3）步驟三所用的培養(yǎng)基通常是在液體培養(yǎng)基中加入適量的

瓊脂

瓊脂

，并需對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。步驟三需同時(shí)設(shè)置

空白平板（接種等量無菌水的平板）

空白平板（接種等量無菌水的平板）

在相同條件下培養(yǎng)作為對(duì)照。
（4）計(jì)數(shù)微生物時(shí)稀釋倍數(shù)必須是適宜的，要保證能獲得菌落數(shù)為

30～300

30～300

之間的平板，因?yàn)檫@種情況下計(jì)數(shù)相對(duì)準(zhǔn)確一些。
（5）已知4個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為85、80、26、75個(gè)，則樣品所含耐熱菌數(shù)為

8×10⁷

8×10⁷

（個(gè)/g）。