有研究表明,肥胖者的脂肪細(xì)胞中某基因(miR)的表達(dá)異常活躍。旨在研究miR的表達(dá)對(duì)人脂肪細(xì)胞的影響,根據(jù)以下實(shí)驗(yàn)材料完成實(shí)驗(yàn)思路,并預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析。
實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)瓶若干,細(xì)胞培養(yǎng)液,脂肪前體細(xì)胞懸液、成熟脂肪細(xì)胞懸液,抑制劑P(抑制miR的表達(dá)),TUNEL檢測(cè)試劑盒(檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況),流式細(xì)胞測(cè)定儀(檢測(cè)細(xì)胞周期分布),血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,顯微鏡等。
(要求和說(shuō)明:不考慮加入抑制劑P后體積變化等誤差。細(xì)胞只進(jìn)行原代培養(yǎng)且培養(yǎng)條件適宜。成熟脂肪細(xì)胞不具分裂能力。各種儀器操作和指標(biāo)檢測(cè)均不作具體要求)
(1)完善實(shí)驗(yàn)思路:
①取培養(yǎng)瓶并各加入等量適量的細(xì)胞培養(yǎng)液,分組處理如下,每組設(shè)置若干個(gè)重復(fù)樣品。
A組:+脂肪前體細(xì)胞懸液;
B組:+脂肪前體細(xì)胞懸液+抑制劑P;C組:+成熟脂肪細(xì)胞懸液
B組:+脂肪前體細(xì)胞懸液+抑制劑P;C組:+成熟脂肪細(xì)胞懸液
;D組:+成熟脂肪細(xì)胞懸液+抑制劑P。
②各組樣品在相同且適宜的條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后,用TUNEL檢測(cè)試劑盒檢測(cè)成熟脂肪細(xì)胞凋亡情況,借助顯微鏡用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板檢測(cè)脂肪前體細(xì)胞的數(shù)目
借助顯微鏡用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板檢測(cè)脂肪前體細(xì)胞的數(shù)目
,用流式細(xì)胞測(cè)定儀脂肪前體細(xì)胞的細(xì)胞周期分布;
③重復(fù)②若干次;
④對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并分析。
(2)預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:圖1為實(shí)驗(yàn)中A、B組某次測(cè)定的結(jié)果。請(qǐng)?jiān)趫D2坐標(biāo)系中繪制成熟脂肪細(xì)胞數(shù)量變化曲線示意圖(N0表示原始數(shù)量)。
(3)分析與討論:
①實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,抑制劑P主要阻滯脂肪前體細(xì)胞分裂周期的 G1
G1
期,從而抑制細(xì)胞增殖。另外,抑制劑P還能顯著提高成熟脂肪細(xì)胞的凋亡率。
②接種細(xì)胞時(shí),脂肪前體細(xì)胞接種的原始數(shù)量要比N0少
少
(填“多”或“少”)一些,其原因是 需檢測(cè)脂肪前體細(xì)胞增殖,(而成熟脂肪細(xì)胞只凋亡)
需檢測(cè)脂肪前體細(xì)胞增殖,(而成熟脂肪細(xì)胞只凋亡)
。在實(shí)驗(yàn)期間,若每天使用比濁計(jì)A組和B組培養(yǎng)瓶中的渾濁度并進(jìn)行比較分析,其結(jié)果是 A組和B組渾濁度均逐漸增大,且A組大于B組
A組和B組渾濁度均逐漸增大,且A組大于B組
。
③綜上分析,miR的活躍表達(dá)對(duì)脂肪細(xì)胞起到 促進(jìn)分裂,減緩(/抑制)調(diào)亡
促進(jìn)分裂,減緩(/抑制)調(diào)亡
作用,導(dǎo)致肥胖。