大腸桿菌β-半乳糖苷酶（Z酶）可催化底物（X-gal）水解產生藍色物質。在pUC18質粒中，lacZ′編碼Z酶氨基端的一個片段（稱為α-肽），該質粒結構及限制酶識別位點如圖甲所示。已知α-肽、缺失α-肽的Z酶片段單獨存在時均無Z酶活性，共同存在時就會表現出Z酶活性。利用圖乙中的DNA片段與pUC18質粒進行基因工程操作。
（1）限制酶能催化雙鏈DNA分子中磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵（填化學鍵名稱）的斷裂。本實驗可使用限制酶Sal ISal I處理pUC18質粒和圖乙中的DNA片段，再通過DNA連接酶連接，獲得含目的基因的重組質粒。
（2）用重組質粒轉化大腸桿菌，然后將大腸桿菌接種到含氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，由于未發(fā)生轉化的大腸桿菌沒有該質粒，因而不具有氨芐青霉素抗性氨芐青霉素抗性，在該培養(yǎng)基上不能生長。從功能上劃分，該培養(yǎng)基屬于選擇選擇培養(yǎng)基。
（3）當上述培養(yǎng)基中含有X-gal時，生長出的菌落有藍色和白色兩種類型，其中含有重組質粒的大腸桿菌的菌落顏色為白色白色，這是因為目的基因與質粒連接后使lacZ′被破壞，不能合成α-肽目的基因與質粒連接后使lacZ′被破壞，不能合成α-肽。為保證能通過菌落顏色辨別出含有重組質粒的大腸桿菌，本實驗作為受體細胞的大腸桿菌中Z酶基因應滿足的條件是編碼α-肽的DNA序列缺失，其他序列正常編碼α-肽的DNA序列缺失，其他序列正常。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】磷酸二酯鍵；Sal I；氨芐青霉素抗性；選擇；白色；目的基因與質粒連接后使lacZ′被破壞，不能合成α-肽；編碼α-肽的DNA序列缺失，其他序列正常
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：44難度：0.7
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