1．圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識(shí)別序列?；卮鹣铝袉?wèn)題。
表1
| pU702pZHZ8 |
| BglI5.7kb6.7kb |
表2
| 固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） |
0 |
1 |
2 |
5 |
10 |
| 不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長(zhǎng)狀況 |
+++++ |
+++ |
+ |
- |
- |
+表示生長(zhǎng)；-表示不生長(zhǎng)。
（1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識(shí)別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的
斷裂，切割形成的末端有
兩種。
（2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長(zhǎng)度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進(jìn)行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長(zhǎng)度見(jiàn)表1。由此判斷目的基因的片段長(zhǎng)度為
kb,判定目的基因中含有一個(gè)BglⅡ切割位點(diǎn)的理由是
。
（3）導(dǎo)入目的基因時(shí)，首先用Ca
2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下可以促進(jìn)鏈霉菌完成
過(guò)程。
（4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)狀況如表2所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細(xì)胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在
μg/mL以上，挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
。若要檢測(cè)整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測(cè)受體細(xì)胞的
（填“DNA”或“RNA”），檢測(cè)方法應(yīng)采用
技術(shù)。
