紅景天中的HMA3基因能編碼Cd轉(zhuǎn)運蛋白，科研人員將紅景天中的HMA3基因轉(zhuǎn)入欒樹，以實現(xiàn)欒樹的定向改良，使其增強(qiáng)對Cd的富集能力，從而更有效治理Cd污染。實驗的主要流程如下，其中Hygr為潮霉素抗性基因，Kanr為卡拉霉素抗性基因，請回答：
（1）重組質(zhì)粒的構(gòu)建、擴(kuò)增、保存
①從紅景天細(xì)胞中提取總RNA為模板，進(jìn)行RTPCR。其中PCR的反應(yīng)條件：98℃10s,55℃30s,72℃1min,35個循環(huán)，其中55℃30s過程稱為 復(fù)性復(fù)性。若模板雙鏈cDNA的數(shù)量為a個，經(jīng)過35個循環(huán)需要消耗引物的數(shù)量是 2a（235-1）2a（235-1）。
②為構(gòu)建Cd轉(zhuǎn)運蛋白與綠色熒光蛋白（GFP）的融合蛋白，需確保目的基因與質(zhì)粒正確連接。構(gòu)建重組質(zhì)粒時用 BglⅡ和SpeⅠBglⅡ和SpeⅠ酶切PCR純化產(chǎn)物（已添加相應(yīng)酶切位點）及Ti質(zhì)粒，然后通過DNA連接酶進(jìn)行連接制備重組質(zhì)粒，并依次轉(zhuǎn)入大腸桿菌和農(nóng)桿菌。
（2）欒樹愈傷組織的誘導(dǎo)
切割無菌苗將其莖段插入愈傷組織培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)添加 細(xì)胞分裂素和生長素細(xì)胞分裂素和生長素（填植物激素的名稱），放入培養(yǎng)箱，經(jīng)過21d的黑暗誘導(dǎo)，莖段經(jīng) 脫分化脫分化形成愈傷組織。
（3）農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化體系的建立
將農(nóng)桿菌單克隆菌株對欒樹愈傷組織進(jìn)行侵染轉(zhuǎn)化，并用添加 潮霉素潮霉素的培養(yǎng)基篩選出轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織，將愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)成完整植株。
（4）原生質(zhì)體制備及目的基因的檢測和鑒定
①取4g篩選后愈傷組織，用鑷子輕輕搗碎，沖洗。用濾網(wǎng)過濾溶液，將愈傷組織轉(zhuǎn)移至含 纖維素酶和果膠酶纖維素酶和果膠酶的酶解液中處理一段時間獲得原生質(zhì)體。
②在激光共聚焦下觀測到細(xì)胞膜發(fā)出綠色熒光。在本研究中選擇GFP與Cd轉(zhuǎn)運蛋白構(gòu)建融合蛋白的目的是 通過觀察綠色熒光來確定Cd轉(zhuǎn)運蛋白是否表達(dá)以及分布場所通過觀察綠色熒光來確定Cd轉(zhuǎn)運蛋白是否表達(dá)以及分布場所。若要從個體生物學(xué)水平上進(jìn)行目的基因的檢測與鑒定，則可以檢測比較轉(zhuǎn)基因欒樹與野生型欒樹 Cd的富集能力Cd的富集能力。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】復(fù)性；2a（235-1）；BglⅡ和SpeⅠ；細(xì)胞分裂素和生長素；脫分化；潮霉素；纖維素酶和果膠酶；通過觀察綠色熒光來確定Cd轉(zhuǎn)運蛋白是否表達(dá)以及分布場所；Cd的富集能力
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/5 8:0:8組卷：7引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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