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苯丙酮尿癥是單基因遺傳病，科學(xué)家將正?；駾導(dǎo)入該病患者的細胞，以治療該病。圖甲為A、B、C三種質(zhì)粒，圖乙為含有目的基因D的DNA片段，圖丙為重組載體的示意圖。Ap為氨節(jié)青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因，其表達產(chǎn)物可以將無色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成藍色物質(zhì)，使菌落呈藍色，EcoRI（0.7Kb）、PvuI（0.8Kb）為限制酶及其切割位點與復(fù)制原點之間的距離。回答下列問題：
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（1）基因工程操作的核心步驟是
基因表達載體的構(gòu)建
基因表達載體的構(gòu)建
。圖甲中三種質(zhì)粒適宜作為運載體的是質(zhì)粒
B
B
，與另外兩種質(zhì)粒相比，其作為載體的優(yōu)點是
有標記基因，復(fù)制原點不會被限制酶切割
有標記基因，復(fù)制原點不會被限制酶切割
。
（2）獲取目的基因D時應(yīng)選擇乙圖中的
PvuI
PvuI
對其所在的DNA進行切割。如果僅知道D基因首尾的部分核苷酸序列，根據(jù)D基因已知核苷酸序列合成
引物
引物
，利用PCR擴增目的基因。
（3）將目的基因D和甲圖中相應(yīng)質(zhì)粒連接后，得到圖丙中三種方式。為選出正向連接的重組質(zhì)粒，使用
EcoRI
EcoRI
對質(zhì)粒完全酶切后，進行電泳分析。若是正向連接載體，電泳圖譜中出現(xiàn)長度為
1.2
1.2
Kb和
5.5
5.5
Kb兩條帶。
（4）利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞，要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細胞和未轉(zhuǎn)化成功的細胞中篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細胞的方法是
在含有氨苯青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成白色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞
在含有氨苯青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成白色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞
。

【答案】基因表達載體的構(gòu)建；B；有標記基因，復(fù)制原點不會被限制酶切割；PvuI；引物；EcoRI；1.2；5.5；在含有氨苯青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成白色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：80引用：4難度：0.7
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  • 1．利用基因工程生產(chǎn)羧酸酯酶（CarE）制劑的流程如圖所示，下列敘述不正確的是（　?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/201711/197/1bd70dc0.png" style="vertical-align:middle" />

    發(fā)布：2024/10/28 21:30:2組卷：25引用：2難度：0.7

  • 2．我國科學(xué)家將人類的生長激素（GH）基因?qū)膈庺~的受精卵，培育出能快速生長的轉(zhuǎn)基因鯉魚。下列敘述錯誤的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/10/28 17:0:2組卷：9引用：2難度：0.7

  • 3．科學(xué)家對乳酸脫氫酶（LDH）進行了改造，使其能夠高效地生產(chǎn)高純度的苯乳酸?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問題：
    （1科學(xué)家改造乳酸脫氫酶時需要做的第一步是
     
    。研究發(fā)現(xiàn)，要將LDH基因改造成為mLDH（改造后的乳酸脫氫酶）基因，需將LDH第52位的酪氨酸替換為亮氨酸，使得活性中心增大，才能用于生產(chǎn)苯乳酸。
    ①先將LDH基因片段連人載體中，形成環(huán)狀質(zhì)粒（如圖1）。
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    將突變后的序列設(shè)計在引物1中，以環(huán)狀質(zhì)粒為PCR的
     
    ，再向體系中加入四種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶、
     
    ，以及堿基替換了的引物擴增LDH基因，PCR產(chǎn)物的序列便引入了預(yù)期的突變。
    ②上述PCR產(chǎn)物為鏈狀DNA分子，改造后的LDH基因序列位于PCR產(chǎn)物的兩側(cè)，需要用
     
    酶將產(chǎn)物兩端連接，獲得含有mLDH基因的質(zhì)粒。
    （2）產(chǎn)生苯乳酸的過程還需FDH酶參與。現(xiàn)需要構(gòu)建同時含有mLDH、FDH的基因表達載體。請你根據(jù)圖2，提出將兩個基因依次連入載體的思路：
     
    （要體現(xiàn)選用的內(nèi)切酶和連接的先后順序）。
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    （3）上述科學(xué)實踐屬于生物工程中的
     
    工程。在生命科學(xué)高速發(fā)展的今天，基因改造已十分成熟，但有一些紅線不能觸碰，請你舉出一例我國明令禁止的生物工程應(yīng)用：
     
    。

    發(fā)布：2024/10/28 17:0:2組卷：9引用：2難度：0.6
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