內皮素(ET)是一種含21個氨基酸的多肽,具有強烈的促進血管收縮和促進平滑肌細胞增殖等作用,其功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯(lián)系。內皮素(ET)主要通過與靶細胞膜上的ET受體(ETA)結合而發(fā)揮生物學效應。科研人員通過構建表達載體,實現(xiàn)ETA基因在大腸桿菌細胞中的高效表達,其過程如圖所示,圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因,限制酶Apa I的識別序列為,限制酶Xho I的識別序列為。
請據(jù)圖分析回答:
(1)進行過程①時,需要加入緩沖液、引物、脫氧核苷酸和 逆轉錄逆轉錄酶等。完成過程①②③的目的是 獲取目的基因(ETA)基因獲取目的基因(ETA)基因。
(2)過程③和⑤中,限制酶Xho I切割DNA,使 磷酸二酯磷酸二酯鍵斷開,形成的黏性末端是 。用兩種限制酶切割,獲得不同的黏性末端,其主要目的是 使目的基因定向連接到運載體上(或防止目的基因環(huán)化)使目的基因定向連接到運載體上(或防止目的基因環(huán)化)。
(3)構建的重組表達載體,目的基因上游的啟動子是 RNA聚合酶識別和結合RNA聚合酶識別和結合的部位,進而可驅動基因的轉錄。除圖中已標出的結構外,基因表達載體還應具有的結構是 復制原點、終止子復制原點、終止子。
(4)過程⑥要用CaCl2預先處理大腸桿菌,使其成為容易吸收外界DNA的 感受態(tài)感受態(tài)細胞。
(5)將SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因,其目的是有利于檢測 ETA基因能否表達及表達量ETA基因能否表達及表達量。
(6)大腸桿菌等原核生物不僅可以作為基因工程的受體細胞,它們往往還含有一些有重要價值的外源基因,而這些外源基因無需改造和修飾就可在葉綠體中高效表達,原因是 葉綠體DNA與原核生物DNA結構類似葉綠體DNA與原核生物DNA結構類似。基因工程操作時可將外源基因整合到葉綠體基因組中,不僅能有效改良植物的品質,還由于葉綠體轉基因不會隨 花粉花粉(“花粉”或“卵細胞”)傳給后代,從而能在一定程度上避免轉基因作物中的外源基因擴散到其他同類作物。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】逆轉錄;獲取目的基因(ETA)基因;磷酸二酯;;使目的基因定向連接到運載體上(或防止目的基因環(huán)化);RNA聚合酶識別和結合;復制原點、終止子;感受態(tài);ETA基因能否表達及表達量;葉綠體DNA與原核生物DNA結構類似;花粉
【解答】
【點評】
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