圖甲為構(gòu)建重組質(zhì)粒過程中的三種備選質(zhì)粒，其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因。圖乙為培育轉(zhuǎn)AFPs基因（抗凍基因）番茄的示意圖，外源DNA和質(zhì)粒上均標(biāo)出了酶切位點(diǎn)及相關(guān)抗性基因，請(qǐng)回答下列問題。
（1）圖甲中通常選用質(zhì)粒C構(gòu)建重組質(zhì)粒，不選用質(zhì)粒A的原因是
質(zhì)粒A中沒有標(biāo)記基因
質(zhì)粒A中沒有標(biāo)記基因
；復(fù)制原點(diǎn)處A和T特別多，其分子機(jī)理是 氫鍵相對(duì)少，不穩(wěn)定，DNA容易解旋，容易和引物結(jié)合，作為復(fù)制起點(diǎn)
氫鍵相對(duì)少，不穩(wěn)定，DNA容易解旋，容易和引物結(jié)合，作為復(fù)制起點(diǎn)
，不選用質(zhì)粒B構(gòu)建重組質(zhì)粒的原因是 質(zhì)粒B的復(fù)制原點(diǎn)中含有HindⅢ酶切位點(diǎn)，如選用HindⅢ酶作為限制酶，會(huì)破壞復(fù)制原點(diǎn)
質(zhì)粒B的復(fù)制原點(diǎn)中含有HindⅢ酶切位點(diǎn)，如選用HindⅢ酶作為限制酶，會(huì)破壞復(fù)制原點(diǎn)
。
（2）據(jù)圖乙分析，若成功構(gòu)建重組質(zhì)粒以利于篩選鑒定，應(yīng)優(yōu)先選用的兩種限制酶分別是 BamHⅠ
BamHⅠ
和 HindⅢ
HindⅢ
切割目的基因和質(zhì)粒，采用兩種限制酶的另一優(yōu)點(diǎn)是 避免目的基因和質(zhì)粒被切割后自身環(huán)化
避免目的基因和質(zhì)粒被切割后自身環(huán)化
。
（3）PCR技術(shù)的原理是 DNA半保留復(fù)制
DNA半保留復(fù)制
，通過PCR技術(shù)獲取目的基因時(shí)需設(shè)計(jì) 2
2
種引物，引物是一小段 能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸
能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸
。
（4）圖乙農(nóng)桿菌中的質(zhì)粒應(yīng)含有T-DNA，其作用是 攜帶目的基因進(jìn)入番茄細(xì)胞并整合到番茄細(xì)胞的染色體DNA
攜帶目的基因進(jìn)入番茄細(xì)胞并整合到番茄細(xì)胞的染色體DNA
。若要獲得抗凍能力更強(qiáng)的抗凍番茄，可以對(duì)AFPs基因進(jìn)行改造，最終得到相應(yīng)的蛋白質(zhì)，該過程需用到 蛋白質(zhì)
蛋白質(zhì)
工程。
