人類胰島素基因位于第11號染色體上，長度為8416bp,人類胰島素的氨基酸序列已知?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問題。

（1）如圖是利用PCR技術(shù)獲取人胰島素基因的方法，除了此方法外，還可以利用的方法是

從基因文庫獲取或人工合成

從基因文庫獲取或人工合成

。
（2）利用PCR技術(shù)獲取人胰島素基因，在緩沖液中除了要添加模板和引物外，還需要添加的物質(zhì)有

四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）

四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）

。
（3）至少經(jīng)過

3

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輪循環(huán)可以得到所需的目的基因，一個DNA分子經(jīng)過5輪循環(huán)，需要引物A

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個，從PCR的過程和DNA分子的特點，試著寫出設(shè)計引物需要注意的問題：

引物自身不能有互補序列 引物之間不能有互補序列

引物自身不能有互補序列 引物之間不能有互補序列

、

引物長度適當(dāng)、引物能與目的基因兩側(cè)特異性結(jié)合、避免與擴增DNA內(nèi)有過多互補的序列

引物長度適當(dāng)、引物能與目的基因兩側(cè)特異性結(jié)合、避免與擴增DNA內(nèi)有過多互補的序列

（答出2點即可）。
（4）利用瓊脂糖凝膠電泳分離不同DNA分子，遷移速率與

凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象

凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象

，（寫出3點）等有關(guān)。
（5）利用圖示方法獲取的目的基因，直接構(gòu)建基因表達載體后導(dǎo)入大腸桿菌，

不能

不能

（填“能”或“不能”）表達出人胰島素，理由是

因為此方法獲得的目的基因中含有內(nèi)含子，大腸桿菌無法正常識別內(nèi)含子而對內(nèi)含子部分轉(zhuǎn)錄的mRNA進行翻譯，導(dǎo)致合成的蛋白質(zhì)出現(xiàn)錯誤

因為此方法獲得的目的基因中含有內(nèi)含子，大腸桿菌無法正常識別內(nèi)含子而對內(nèi)含子部分轉(zhuǎn)錄的mRNA進行翻譯，導(dǎo)致合成的蛋白質(zhì)出現(xiàn)錯誤

。