某種地中海貧血（TDT）是嚴重的單基因病，嚴重時可能危及生命。人類γ基因啟動子上游的調控序列中含有BCL11A蛋白結合位點，該位點結合BCL11A蛋白后，γ基因的表達被抑制。通過改變該結合位點的序列，解除對γ基因表達的抑制，可對TDT患者實行基因治療。研究人員擴增了γ基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入表達載體中進行轉化和熒光檢測，可以確定BCL11A蛋白結合位點的具體位置。相關信息如圖所示。分析回答：
（1）圖中啟動子是 RNA聚合酶RNA聚合酶識別和結合位點，綠色熒光蛋白基因作為 標記基因標記基因。
（2）PCR擴增γ基因上游不同DNA片段的原理是 DNA雙鏈復制DNA雙鏈復制，為使PCR反應體系中的模板解鏈為單鏈，需要滿足的條件是 加熱（至90-95℃）加熱（至90-95℃）。
（3）將擴增后的產(chǎn)物定向插入載體指導綠色熒光蛋白基因表達，需要在引物末端添加限制酶識別序列。據(jù)圖可知，在R末端添加的序列所對應的限制酶應為 EcoRⅠEcoRⅠ。實驗中R等引物的作用是 使DNA聚合酶（Taq酶）從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶（Taq酶）從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
（4）從產(chǎn)物擴增到載體構建完成的整個過程中，除限制酶外，還必須用到的工具酶有DNA連接酶和 耐熱的DNA聚合酶耐熱的DNA聚合酶，其中前者催化形成的化學鍵是 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。
（5）將構建好的載體成功轉化至除去BCL11A基因的受體細胞中，結果發(fā)現(xiàn)，含F(xiàn)1～F6與R擴增產(chǎn)物的受體細胞發(fā)出綠色熒光。向培養(yǎng)液中添加適量的雄激素，含F(xiàn)1～F4與R擴增產(chǎn)物的受體細胞熒光消失，而含F(xiàn)5～F6與R擴增產(chǎn)物的受體細胞仍有熒光。若γ基因上游的調控序列上與引物所對應的位置不含有BCL11A蛋白的結合位點序列，據(jù)此結果可推測，BCL11A蛋白結合位點位于 引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】RNA聚合酶；標記基因；DNA雙鏈復制；加熱（至90-95℃）；EcoRⅠ；使DNA聚合酶（Taq酶）從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；耐熱的DNA聚合酶；磷酸二酯鍵；引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：4難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6