亮氨酸脫氫酶是一類氧化還原酶，在臨床生化診斷上有重要作用。有研究表明，在亮氨酸脫氫酶基因原有啟動(dòng)子（PHpaII）之后加上信號(hào)肽（引導(dǎo)新合成的蛋白質(zhì)向分泌通路轉(zhuǎn)移的一段肽鏈）序列，可提高亮氨酸脫氫酶產(chǎn)量?？蒲腥藛T進(jìn)一步研究雙啟動(dòng)子（PHpaII、PamyQ）及雙啟動(dòng)子后再分別添加3種信號(hào)肽序列對(duì)亮氨酸脫氫酶產(chǎn)量的影響，主要實(shí)驗(yàn)流程如圖。請回答下列問題。
（1）啟動(dòng)子的功能是
RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄
RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄
。組成信號(hào)肽的基本單位是 氨基酸
氨基酸
。
（2）過程①中，PCR反應(yīng)體系中添加的dNTP的功能有 作為原料、提供能量
作為原料、提供能量
，添加的一對(duì)引物是 P1和P3
P1和P3
。
P1：5′-GGGAATCATATGGGCGGCGTTCTGTTTCTG-3′
P2：5′-CCGATTAAGCTTGGCGGCGTTCTGCATCTG-3′
P3：5′-CGCGGATCCATAAGGCAGTAAAGAGGCTTTTG-3′
P4：5′-GCCGGATCCACAAGGCAGTATTTACTGCCTT-3′
（3）過程②中，啟動(dòng)子PamyQ能與質(zhì)粒1連接的分子基礎(chǔ)是 都是由脫氧核苷酸構(gòu)成的雙鏈結(jié)構(gòu)
都是由脫氧核苷酸構(gòu)成的雙鏈結(jié)構(gòu)
。將重組質(zhì)粒1導(dǎo)入枯草桿菌前先用Ca2+處理枯草桿菌，其主要目的是 使枯草桿菌處于感受態(tài)
使枯草桿菌處于感受態(tài)
。轉(zhuǎn)化后的枯草桿菌一般要用稀釋涂布平板法接種到添加 卡那霉素
卡那霉素
的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。
（4）科研人員將質(zhì)粒1、重組質(zhì)粒1和3種重組質(zhì)粒2分別導(dǎo)入枯草桿菌得到甲～戊5種重組枯草桿菌，進(jìn)行發(fā)酵后提取上清液中的亮氨酸脫氫酶，酶活力測定結(jié)果如表。
| 重組菌 |
甲 |
乙 |
丙 |
丁 |
戊 |
| 酶活力/U?mL-1 |
10.11 |
31.24 |
0.44 |
6.49 |
21.76 |
①結(jié)果表明，
添加雙啟動(dòng)子
添加雙啟動(dòng)子
最有利于提高亮氨酸脫氫酶產(chǎn)量。
②雙啟動(dòng)子后添加信號(hào)肽序列影響酶的表達(dá)或分泌量的原因可能有
ac
ac
。
a.信號(hào)肽序列影響了亮氨酸脫氫酶基因的表達(dá)
b.信號(hào)肽序列影響了啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的mRNA序列
c.信號(hào)肽序列表達(dá)產(chǎn)物使亮氨酸脫氫酶分泌路徑發(fā)生改變
