亮氨酸脫氫酶是一類氧化還原酶，在臨床生化診斷上有重要作用。有研究表明，在亮氨酸脫氫酶基因原有啟動(dòng)子（PHpaII）之后加上信號(hào)肽（引導(dǎo)新合成的蛋白質(zhì)向分泌通路轉(zhuǎn)移的一段肽鏈）序列，可提高亮氨酸脫氫酶產(chǎn)量。科研人員進(jìn)一步研究雙啟動(dòng)子（PHpaII、PamyQ）及雙啟動(dòng)子后再分別添加3種信號(hào)肽序列對(duì)亮氨酸脫氫酶產(chǎn)量的影響，主要實(shí)驗(yàn)流程如圖。請(qǐng)回答下列問題。
（1）啟動(dòng)子的功能是 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄。組成信號(hào)肽的基本單位是 氨基酸氨基酸。
（2）過程①中，PCR反應(yīng)體系中添加的dNTP的功能有 作為原料、提供能量作為原料、提供能量，添加的一對(duì)引物是 P1和P3P1和P3。
P1：5′-GGGAATCATATGGGCGGCGTTCTGTTTCTG-3′
P2：5′-CCGATTAAGCTTGGCGGCGTTCTGCATCTG-3′
P3：5′-CGCGGATCCATAAGGCAGTAAAGAGGCTTTTG-3′
P4：5′-GCCGGATCCACAAGGCAGTATTTACTGCCTT-3′
（3）過程②中，啟動(dòng)子PamyQ能與質(zhì)粒1連接的分子基礎(chǔ)是 都是由脫氧核苷酸構(gòu)成的雙鏈結(jié)構(gòu)都是由脫氧核苷酸構(gòu)成的雙鏈結(jié)構(gòu)。將重組質(zhì)粒1導(dǎo)入枯草桿菌前先用Ca2+處理枯草桿菌，其主要目的是 使枯草桿菌處于感受態(tài)使枯草桿菌處于感受態(tài)。轉(zhuǎn)化后的枯草桿菌一般要用稀釋涂布平板法接種到添加 卡那霉素卡那霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。
（4）科研人員將質(zhì)粒1、重組質(zhì)粒1和3種重組質(zhì)粒2分別導(dǎo)入枯草桿菌得到甲～戊5種重組枯草桿菌，進(jìn)行發(fā)酵后提取上清液中的亮氨酸脫氫酶，酶活力測(cè)定結(jié)果如表。
| 重組菌 | 甲 | 乙 | 丙 | 丁 | 戊 |
| 酶活力/U?mL-1 | 10.11 | 31.24 | 0.44 | 6.49 | 21.76 |
添加雙啟動(dòng)子
添加雙啟動(dòng)子
最有利于提高亮氨酸脫氫酶產(chǎn)量。②雙啟動(dòng)子后添加信號(hào)肽序列影響酶的表達(dá)或分泌量的原因可能有
ac
ac
。a.信號(hào)肽序列影響了亮氨酸脫氫酶基因的表達(dá)
b.信號(hào)肽序列影響了啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的mRNA序列
c.信號(hào)肽序列表達(dá)產(chǎn)物使亮氨酸脫氫酶分泌路徑發(fā)生改變
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄；氨基酸；作為原料、提供能量；P1和P3；都是由脫氧核苷酸構(gòu)成的雙鏈結(jié)構(gòu)；使枯草桿菌處于感受態(tài)；卡那霉素；添加雙啟動(dòng)子；ac
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/11/26 16:0:1組卷：29引用：4難度：0.6
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（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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