大腸桿菌pUC18質(zhì)粒是基因工程中常用的運載體。某限制酶在此質(zhì)粒上的唯一酶切位點位于LacZ基因中，如果沒有插入外源基因，LacZ基因便可表達出口一半乳糖苷酶。當培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時，X-gal便會被β一半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落。反之，則形成白色菌落。下圖表示利用此質(zhì)粒實施基因工程的主要流程。
請分析并回答：
（1）已獲得的目的基因可利用 PCRPCR技術進行擴增。
（2）目的基因插入質(zhì)粒構建重組質(zhì)粒的過程中，需要DNA連接酶恢復 磷酸二酯磷酸二酯鍵。
（3）將試管I中的物質(zhì)和大腸桿菌共同置于試管Ⅱ的目的是 進行轉(zhuǎn)化進行轉(zhuǎn)化；大腸桿菌需事先用Ca2+進行處理，目的是 使大腸桿菌細胞處于感受態(tài)使大腸桿菌細胞處于感受態(tài)。
（4）將試管Ⅱ中的菌液接種于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基中應含有大腸桿菌必需的營養(yǎng)物質(zhì)包括 碳源、氮源、無機鹽、水碳源、氮源、無機鹽、水和生長因子，還應加入IPTG、X-gal以及氨芐青霉素，其中加入氨芐青霉素的作用是篩選出 導入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌導入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌。
（5）若觀察到培養(yǎng)基上出現(xiàn) 白白色菌落，則說明大腸桿菌中已成功導入了重組質(zhì)粒。如果作為受體細胞的大腸桿菌也含有LacZ基因，則不利于重組質(zhì)粒的篩選，原因是 無論大腸桿菌是否導入重組質(zhì)粒，均會呈現(xiàn)藍色菌落無論大腸桿菌是否導入重組質(zhì)粒，均會呈現(xiàn)藍色菌落。
【答案】PCR；磷酸二酯；進行轉(zhuǎn)化；使大腸桿菌細胞處于感受態(tài)；碳源、氮源、無機鹽、水；導入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌；白；無論大腸桿菌是否導入重組質(zhì)粒，均會呈現(xiàn)藍色菌落
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：77引用：11難度：0.5
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