人乳鐵蛋白（hLF）對(duì)細(xì)菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如下圖。圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點(diǎn)，neo^r為新霉素抗性基因，BLG基因?yàn)锽乳球蛋白基因，GFP基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。

（1）過(guò)程①中，不能從人肌肉細(xì)胞中提取RNA用于RT-PCR，是因?yàn)?

hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄（表達(dá)）

hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄（表達(dá)）

。熒光RT﹣PCR技術(shù)所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有

逆（反）轉(zhuǎn)錄酶

逆（反）轉(zhuǎn)錄酶

、Taq酶、熒光標(biāo)記的核酸探針、引物、dNTP、緩沖體系。
（2）在RT-PCR過(guò)程中，加入的引物需在

5'

5'

端添加

SalⅠ和BamHⅠ

SalⅠ和BamHⅠ

兩種限制酶的識(shí)別序列，便于hLF基因插入pEB中。利用RT-PCR技術(shù)獲取的目的基因

能

能

（填“能”或“不能”）在物種之間交流；該技術(shù)還可用于對(duì)某些微量RNA病毒的檢測(cè)，可提高檢測(cè)的靈敏度，原因是

增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測(cè)

增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測(cè)

。若利用PCR技術(shù)擴(kuò)增某基因片段時(shí)消耗了126個(gè)引物分子，則該過(guò)程擴(kuò)增了

6

6

次。
（3）過(guò)程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是

使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)（或使目的基因表達(dá)）

使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)（或使目的基因表達(dá)）

；該過(guò)程中，兩個(gè)基因共用的調(diào)控元件是BLG基因的

啟動(dòng)子

啟動(dòng)子

。
（4）PEBL質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是

脂質(zhì)體介導(dǎo)

脂質(zhì)體介導(dǎo)

，依據(jù)的主要原理是

生物膜具有一定的流動(dòng)性

生物膜具有一定的流動(dòng)性

。
（5）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細(xì)胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞中

是否有綠色熒光

是否有綠色熒光

，以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。該過(guò)程

不能

不能

（填“能”或“不能”）區(qū)分普通質(zhì)粒或重組質(zhì)粒，接下來(lái)還可采用

分子雜交

分子雜交

技術(shù)檢驗(yàn)基因是否成功轉(zhuǎn)錄。