非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒(ASFV)感染家豬和野豬引起的一種高致病性傳染病??蒲腥藛T在病毒ASFV的K基因(大小為790bp)中間插入熒光素酶基因(Gluc基因)和增強型綠色熒光蛋白基因(EGFP基因),從而構(gòu)建可以進行快速觀察及定量檢測酶活性的重組病毒(ASFV-Gluc-EGFP)體系,如圖1所示?;卮鹣铝袉栴}:

(1)構(gòu)建重組病毒時用的HindⅢ和BamHⅠ都是 限制性核酸內(nèi)切(或限制)限制性核酸內(nèi)切(或限制)酶。
(2)為了初步鑒定重組病毒是否構(gòu)建成功,科研人員提取病毒DNA,選用引物組合 引物1和引物4引物1和引物4進行PCR擴增,擴增結(jié)果有1、2兩種類型,如圖2所示。該實驗結(jié)果表明Gluc基因和EGFP基因 有有(填“有”或“沒有”)插入病毒ASFV的K基因。

(3)為了進一步驗證重組病毒是否成功表達,科研人員將豬肺泡巨噬細胞(PAMS)培養(yǎng)一段時間后,平均分成A、B兩組,其中A組接種病毒ASFV,B組接種 重組病毒重組病毒。支持“重組病毒成功表達”的實驗結(jié)果為:B組可觀察到綠色熒光,檢測到熒光素酶有活性;A組無熒光,熒光素酶無活性B組可觀察到綠色熒光,檢測到熒光素酶有活性;A組無熒光,熒光素酶無活性。
(4)同時,科研人員又分別測定了A、B兩組的病毒數(shù)量變化,發(fā)現(xiàn)兩者無顯著差異,該結(jié)果表明 Gluc基因和EGFP基因的插入不影響病毒的復(fù)制Gluc基因和EGFP基因的插入不影響病毒的復(fù)制。因此,該重組病毒體系的構(gòu)建可為后續(xù)研究ASFV的致病機制及藥物治療奠定基礎(chǔ)。
【答案】限制性核酸內(nèi)切(或限制);引物1和引物4;有;重組病毒;B組可觀察到綠色熒光,檢測到熒光素酶有活性;A組無熒光,熒光素酶無活性;Gluc基因和EGFP基因的插入不影響病毒的復(fù)制
【解答】
【點評】
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