紅景天中的HMA3基因能編碼Cd轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。科研人員將紅景天中的HMA3基因轉(zhuǎn)入欒樹，以實(shí)現(xiàn)欒樹的定向改良，使其增強(qiáng)對Cd的富集能力，從而更有效治理Cd污染。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖，其中Hygr為潮霉素抗性基因，Kanr為卡拉霉素抗性基因。下表為限制酶的識別序列和切割位點(diǎn)。請回答下列問題。
| EcoRⅠ | BamHⅠ | HindⅢ | Sau3AⅠ | BglⅡ | XbaⅠ |
| G↓AATTC | G↓GATCC | A↓AGCTT | ↓GATC | A↓GATCT | T↓CTAGA |
①從紅景天細(xì)胞中提取總RNA為模板，進(jìn)行RT-PCR，該過程需要加入的酶有
耐高溫的DNA聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶
耐高溫的DNA聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶
。PCR過程中在循環(huán)前常要進(jìn)行一次94℃、5min預(yù)變性，其目的是 增加模板DNA徹底變性的概率（使模板DNA充分變性）
增加模板DNA徹底變性的概率（使模板DNA充分變性）
。②據(jù)以上圖表分析，為構(gòu)建Cd轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與綠色熒光蛋白（GFP）的融合蛋白，進(jìn)行PCR擴(kuò)增HMA3基因時(shí)需要在引物的5′端添加限制酶
BglⅡ和HindⅢ
BglⅡ和HindⅢ
的識別序列，以確保目的基因與質(zhì)粒正確連接。至少需要 3
3
個(gè)循環(huán)才能獲得預(yù)期的基因。若模板HMA3基因的數(shù)量為a個(gè)，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)后，產(chǎn)物中同時(shí)含有兩種引物的DNA有 （235-2）a
（235-2）a
個(gè)。③通過DNA連接酶進(jìn)行連接制備重組質(zhì)粒，并依次轉(zhuǎn)入大腸桿菌和農(nóng)桿菌。其中將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌的主要目的是
讓其在大腸桿菌中復(fù)制、保存
讓其在大腸桿菌中復(fù)制、保存
（2）欒樹愈傷組織的誘導(dǎo)：
切割無菌苗將其莖段插入愈傷組織培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)添加
細(xì)胞分裂素和生長素
細(xì)胞分裂素和生長素
（填植物激素的名稱），放入培養(yǎng)箱，經(jīng)過21d的黑暗誘導(dǎo)，形成愈傷組織。（3）農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化體系的建立：
將農(nóng)桿菌單克隆菌株對欒樹愈傷組織進(jìn)行侵染轉(zhuǎn)化，并用添加
潮霉素
潮霉素
的培養(yǎng)基篩選出轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織，將愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)成完整植株。（4）原生質(zhì)體制備及目的基因的檢測和鑒定：
①取4g篩選后愈傷組織，用鑷子輕輕搗碎，沖洗。用濾網(wǎng)過濾溶液，將愈傷組織轉(zhuǎn)移至含
纖維素酶和果膠酶
纖維素酶和果膠酶
的酶解液中處理一段時(shí)間獲得原生質(zhì)體。②在激光共聚焦下觀測到細(xì)胞膜發(fā)出綠色熒光。在本研究中選擇GFP與Cd轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白構(gòu)建融合蛋白的目的是
通過觀察綠色熒光來確定Cd轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是否表達(dá)以及分布場所
通過觀察綠色熒光來確定Cd轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是否表達(dá)以及分布場所
?？茖W(xué)家們已通過蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出了藍(lán)色熒光蛋白，正確的順序是 ②①③④
②①③④
（用下列序號表示）。①推測藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)
③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）
④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】耐高溫的DNA聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶；增加模板DNA徹底變性的概率（使模板DNA充分變性）；BglⅡ和HindⅢ；3；（235-2）a；讓其在大腸桿菌中復(fù)制、保存；細(xì)胞分裂素和生長素；潮霉素；纖維素酶和果膠酶；通過觀察綠色熒光來確定Cd轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是否表達(dá)以及分布場所；②①③④
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/5/23 8:0:8組卷：9引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6