CRISPR/Cas9基因編輯技術可以按照人們的意愿精準剪切、改變任意靶基因的遺傳信息,對該研究有突出貢獻的科學家被授予2020年諾貝爾化學獎。我國科學家領銜的團隊利用CRISPR/Cas9等技術,將人的亨廷頓舞蹈病致病基因(HTT基因)第1外顯子(其中含150個CAG三核苷酸重復序列)“敲入”豬基因組內,獲得了人-豬“鑲嵌”HTT基因,利用胚胎工程技術成功地構建了亨廷頓舞蹈病的動物模型?;卮鹣铝袉栴}:
(1)PCR技術是獲得人HTT基因常用的方法,制備PCR反應體系時,向緩沖溶液中分別加入人HTT基因模板、4種脫氧核糖核苷酸及引物和Taq酶引物和Taq酶等,最后補足H2O。
(2)CRISPR/Cas9基因編輯技術中,SgRNA是根據(jù)靶基因設計的引導RNA,準確引導Cas9切割與SgRNA配對的靶基因DNA序列,由此可見,Cas9在功能上屬于限制性核酸內切限制性核酸內切酶。與CRISPR/Cas9相比,限制酶的特性決定了其具有作用對象單一作用對象單一的局限性。
(3)在實驗過程中,為確認實驗豬細胞基因組內是否含有人-豬“鑲嵌”HTT基因,常用的檢測手段包括PCR技術及基因探針技術基因探針技術。
(4)含有“敲入”序列的豬胚胎成纖維細胞在體外培養(yǎng)時通過細胞分裂,數(shù)量不斷增加,當細胞貼壁生長到表面相互接觸時,細胞停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為接觸抑制接觸抑制。貼滿瓶壁的細胞常用胰蛋白酶胰蛋白酶進行消化處理,以便進行傳代培養(yǎng)。
(5)將含有“敲入”序列的豬胚胎成纖維細胞的細胞核導入去核的卵母細胞的過程稱為核移植核移植。此后進行體外胚胎培養(yǎng)并移植到代孕母豬體內,最終獲得亨廷頓舞蹈病動物模型。
【答案】引物和Taq酶;限制性核酸內切;作用對象單一;基因探針技術;接觸抑制;胰蛋白酶;核移植
【解答】
【點評】
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