In-Fusion技術(shù)是一項新型的無縫克隆技術(shù)。該技術(shù)關(guān)鍵是要在目的基因兩端構(gòu)建與線性化質(zhì)粒末端相同的DNA序列（即同源序列，通常為15-20bp），然后用In-Fusion酶處理即可實現(xiàn)無縫連接。它的操作步驟大致為：①利用PCR技術(shù)將質(zhì)粒線性化；
②PCR擴(kuò)增出兩端含線性化質(zhì)粒同源序列的目的基因；
③目的基因與線性化質(zhì)粒同源區(qū)域在In-Fusion酶作用下形成重組質(zhì)粒；
④將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞。
回答下列問題。
（1）過程①需要用到的酶是 耐高溫的DNA聚合酶耐高溫的DNA聚合酶。過程③中，同源序列1與同源序列2中的堿基序列不同，這樣設(shè)計的好處是 防止目的基因反向連接，防止線性化質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化防止目的基因反向連接，防止線性化質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化。
（2）為保證擴(kuò)增出兩端含線性化質(zhì)粒同源序列的目的基因，引物A或引物B要依據(jù) 目的基因與質(zhì)粒目的基因與質(zhì)粒序列進(jìn)行設(shè)計。
（3）若目的基因是氨芐青霉素抗性基因，以大腸桿菌作為受體細(xì)胞。為檢測已轉(zhuǎn)化大腸桿菌的抗性效果，在含有氨芐青霉素和不含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上分別接種等量的已轉(zhuǎn)化大腸桿菌并培養(yǎng)相同時間，然后采用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)，若結(jié)果較真實值偏小，原因是 當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落。
（4）與傳統(tǒng)構(gòu)建重組質(zhì)粒的方法相比，In-Fusion技術(shù)的優(yōu)勢有 不受限制酶酶切位點的限制；可以把目的基因插入任何位點；避免限制酶切割對質(zhì)粒功能區(qū)的破壞不受限制酶酶切位點的限制；可以把目的基因插入任何位點；避免限制酶切割對質(zhì)粒功能區(qū)的破壞。（至少答出兩點）
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】耐高溫的DNA聚合酶；防止目的基因反向連接，防止線性化質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化；目的基因與質(zhì)粒；稀釋涂布平板；當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落；不受限制酶酶切位點的限制；可以把目的基因插入任何位點；避免限制酶切割對質(zhì)粒功能區(qū)的破壞
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/9 8:0:9組卷：6引用：2難度：0.6
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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