2007年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予在“基因靶向”技術(shù)方面作出突出貢獻(xiàn)的三位科學(xué)家?！盎虬邢颉奔夹g(shù)指的是應(yīng)用DNA同源重組原理，通過(guò)一定的載體，用設(shè)計(jì)好的目的基因替代靶基因，從而達(dá)到使靶基因功能喪失的目的。借助這一技術(shù)，科學(xué)家可以用小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使其體內(nèi)的某項(xiàng)特定基因喪失功能，以幫助人們找到治療疾病的有效方法。下面是該實(shí)驗(yàn)的基本過(guò)程，請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題。
（1）獲取目的基因。
①目的基因是靶基因的同源片段。經(jīng)過(guò)修飾使靶基因的功能改變或喪失，就可獲得目的基因。如果要獲得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)，請(qǐng)簡(jiǎn)述其過(guò)程。

X酶蛋白的功能分析→X酶蛋白的三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)和設(shè)計(jì)→X酶多肽的氨基酸序列設(shè)計(jì)→X酶基因的改造

X酶蛋白的功能分析→X酶蛋白的三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)和設(shè)計(jì)→X酶多肽的氨基酸序列設(shè)計(jì)→X酶基因的改造

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②為了提高實(shí)驗(yàn)成功率，需要通過(guò)PCR技術(shù)獲得目的基因的大量拷貝。與體內(nèi)DNA復(fù)制相比，PCR反應(yīng)體系需加入哪兩種特別的物質(zhì)？

兩種引物、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

兩種引物、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

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（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體。質(zhì)粒是具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA，它所具有的一至多個(gè)

限制酶切割

限制酶切割

位點(diǎn)，使目的基因插入其中成為可能，因此常被選作載體。
（3）將基因表達(dá)載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，從中篩選出成功發(fā)生了同源重組的胚胎干細(xì)胞，然后培育出小鼠。
（4）通過(guò)檢測(cè)目的基因是否表達(dá)出蛋白質(zhì)產(chǎn)品，可以確定該小鼠體內(nèi)是否成功發(fā)生了基因的同源重組。請(qǐng)簡(jiǎn)述這種檢測(cè)方法。

提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交

提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交

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