研究發(fā)現(xiàn)，大豆GmNF-YA₁₉基因在不同非生物脅迫中均有響應(yīng)。為研究該基因的功能，科研人員利用PCR擴(kuò)增GmNF-YA₁₉基因，構(gòu)建GmNF-YA₁₉基因表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化煙草，實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖1、2所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）在利用PCR擴(kuò)增GmNF-YA₁₉基因時(shí)，需要設(shè)計(jì)

2

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種特異性引物，引物的作用是

使DNA聚合酶從引物的3‘端開(kāi)始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶從引物的3‘端開(kāi)始連接脫氧核苷酸

。
（2）根據(jù)圖中信息，最好選用

PvuⅡ和EcoRⅠ

PvuⅡ和EcoRⅠ

兩種限制酶切割含目的基因的DNA片段和載體，其原因是

保證目的基因和質(zhì)粒正向連接，避免發(fā)生自身環(huán)化

保證目的基因和質(zhì)粒正向連接，避免發(fā)生自身環(huán)化

（答出2項(xiàng)）。
（3）基因表達(dá)載體導(dǎo)入煙草常用

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

法。有研究表明，GmNF-YA₁₉基因?qū)Ω珊得{迫的應(yīng)答最顯著，科研人員對(duì)GmNF-YA₁₉轉(zhuǎn)基因煙草（OE₁、OE₂和OE₃）的抗旱性進(jìn)行鑒定。對(duì)干旱處理后的WT（野生型）煙草和GmNF-YA₁₉轉(zhuǎn)基因煙草葉片的電解質(zhì)滲透率及丙二醛（二者反應(yīng)葉片損傷程度）、可溶性糖和脯氨酸（二者是細(xì)胞中滲透壓調(diào)節(jié)物質(zhì)）含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖3所示。

由結(jié)果分析，GmNF-YA₁₉基因調(diào)節(jié)的機(jī)理可能是干旱脅迫下，

GmNF-YA₁₉基因的表達(dá)產(chǎn)物促進(jìn)了可溶性糖和脯氨酸的產(chǎn)生，同時(shí)抑制了丙二醛的產(chǎn)生

GmNF-YA₁₉基因的表達(dá)產(chǎn)物促進(jìn)了可溶性糖和脯氨酸的產(chǎn)生，同時(shí)抑制了丙二醛的產(chǎn)生

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