研究發(fā)現(xiàn)人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品?？茖W(xué)家培育出轉(zhuǎn)入溶菌酶基因山羊，可大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶（從乳汁中提取）。其過程如圖所示，其中①～⑨表示過程。亮氨酸是山羊細(xì)胞維持生命活動必不可少的一種必需氨基酸，質(zhì)粒S中的基因Leu通過控制相關(guān)酶的合成控制亮氨酸的合成，基因GFP控制合成綠色熒光蛋白。四種限制酶的識別序列及切割位點(diǎn)見下表。請回答下列問題：
| 限制酶 | BamHⅠ | BglⅡ | HindⅢ | XbaⅠ |
| 識別序列和切割位點(diǎn) | -G↓GATCC- | -A↓GATCT- | -A↓AGCTT- | -T↓CTAGA- |
（1）以胞內(nèi)的mRNA為模板通過反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，將其儲存于受體菌群，從而構(gòu)建
cDNA文庫（部分基因文庫）
cDNA文庫（部分基因文庫）
。過程②需要的限制酶是 BamHⅠ、HindⅢ
BamHⅠ、HindⅢ
。（2）為成功篩選出含重組質(zhì)粒T的成纖維細(xì)胞，質(zhì)粒S中用作標(biāo)記基因的是
基因Leu、基因GFP
基因Leu、基因GFP
。為達(dá)到篩選目的，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分中不應(yīng)含有 亮氨酸
亮氨酸
。將成纖維細(xì)胞培養(yǎng)一段時間后觀察，篩選出 不顯示
不顯示
（選填“顯示”或“不顯示”）綠色熒光的細(xì)胞用于過程⑤。（3）過程④常用儀器為
顯微注射儀
顯微注射儀
。培養(yǎng)過程需對早期胚胎進(jìn)行性別鑒定和胚胎分割，性別鑒定應(yīng)取 滋養(yǎng)層
滋養(yǎng)層
（填“滋養(yǎng)層”或“內(nèi)細(xì)胞團(tuán)”）進(jìn)行SRY-PCR，篩選出雌性動物胚胎并進(jìn)行分割，分割時應(yīng)注意 將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割
將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割
。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】cDNA文庫（部分基因文庫）；BamHⅠ、HindⅢ；基因Leu、基因GFP；亮氨酸；不顯示；顯微注射儀；滋養(yǎng)層；將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：15引用：1難度：0.6
相似題
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1．基因工程技術(shù)又稱為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達(dá)載體中，啟動子是聚合酶識別并結(jié)合的部位．若采用原核生物作為基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
2．科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達(dá)產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細(xì)胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細(xì)胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴(kuò)增該cDNA時的兩個引物對應(yīng)的局部序列（前10個堿基序列），并標(biāo)明5'和3'端：，。一個初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進(jìn)轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
3．基因治療是指將外源正常基因?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細(xì)胞，科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對干擾素基因缺失的小鼠進(jìn)行了基因治療．請回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入基因表達(dá)載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細(xì)胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體DNA分子上，再將能正常表達(dá)干擾素的細(xì)胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導(dǎo)入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細(xì)菌導(dǎo)致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細(xì)胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，以表達(dá)出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進(jìn)行互補(bǔ)結(jié)合，來阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類是編碼可以殺死癌細(xì)胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
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