研究發(fā)現(xiàn)人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品??茖W家培育出轉(zhuǎn)入溶菌酶基因山羊,可大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶(從乳汁中提?。?。其過程如圖所示,其中①~⑨表示過程。亮氨酸是山羊細胞維持生命活動必不可少的一種必需氨基酸,質(zhì)粒S中的基因Leu通過控制相關酶的合成控制亮氨酸的合成,基因GFP控制合成綠色熒光蛋白。四種限制酶的識別序列及切割位點見下表。請回答下列問題:
限制酶 |
BamHⅠ |
BglⅡ |
HindⅢ |
XbaⅠ |
識別序列和切割位點 |
-G↓GATCC- |
-A↓GATCT- |
-A↓AGCTT- |
-T↓CTAGA- |
(1)以胞內(nèi)的mRNA為模板通過反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,將其儲存于受體菌群,從而構建
cDNA文庫(部分基因文庫)
cDNA文庫(部分基因文庫)
。過程②需要的限制酶是
BamHⅠ、HindⅢ
BamHⅠ、HindⅢ
。
(2)為成功篩選出含重組質(zhì)粒T的成纖維細胞,質(zhì)粒S中用作標記基因的是
基因Leu、基因GFP
基因Leu、基因GFP
。為達到篩選目的,培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分中不應含有
亮氨酸
亮氨酸
。將成纖維細胞培養(yǎng)一段時間后觀察,篩選出
不顯示
不顯示
(選填“顯示”或“不顯示”)綠色熒光的細胞用于過程⑤。
(3)過程④常用儀器為
顯微注射儀
顯微注射儀
。培養(yǎng)過程需對早期胚胎進行性別鑒定和胚胎分割,性別鑒定應取
滋養(yǎng)層
滋養(yǎng)層
(填“滋養(yǎng)層”或“內(nèi)細胞團”)進行SRY-PCR,篩選出雌性動物胚胎并進行分割,分割時應注意
將內(nèi)細胞團均等分割
將內(nèi)細胞團均等分割
。