胰島素A、B鏈分別表達(dá)法是生產(chǎn)胰島素的方法之一.如圖是該方法所用的基因表達(dá)載體,請(qǐng)回答下列問題:
(1)圖中基因表達(dá)載體中沒有標(biāo)注出來的基本結(jié)構(gòu)是
終止子
終止子
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(2)圖中啟動(dòng)子是RNA聚合
RNA聚合
酶識(shí)別和結(jié)合的部位,有了它才能啟動(dòng)目的基因的表達(dá);氨芐青霉素抗性基因的作用是作為標(biāo)記基因,將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來
作為標(biāo)記基因,將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來
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(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)必需的工具酶有限制酶和DNA連接酶
限制酶和DNA連接酶
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(4)β-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達(dá),可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點(diǎn)隱藏在內(nèi)部,其意義在于防止胰島素的A、B鏈被菌體內(nèi)蛋白酶降解
防止胰島素的A、B鏈被菌體內(nèi)蛋白酶降解
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(5)溴化氰能切斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵,用溴化氰處理相應(yīng)的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈,且β-半乳糖苷酶被切成多個(gè)肽段,其原因可能是β-半乳糖苷酶中含多個(gè)甲硫氨酸,而胰島素A、B鏈中不含甲硫氨酸
β-半乳糖苷酶中含多個(gè)甲硫氨酸,而胰島素A、B鏈中不含甲硫氨酸
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