人們發(fā)現(xiàn)有機(jī)磷化合物能有效抑制生物體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶，從而表現(xiàn)出很好的殺蟲、滅鼠效果，但是有機(jī)磷化合物會(huì)嚴(yán)重破壞生態(tài)環(huán)境。甲基對(duì)硫磷水解酶（mph）能特異性地與有機(jī)磷化合物結(jié)合，研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)實(shí)現(xiàn)了大腸桿菌高效表達(dá)甲基對(duì)硫磷水解酶（mph），如圖1所示。請(qǐng)根據(jù)基因工程過(guò)程回答以下問(wèn)題：
（1）構(gòu)建一株具有全細(xì)胞催化活性的大腸桿菌工程菌的關(guān)鍵步驟是要構(gòu)建pET23a-gfp-mph-r的 基因表達(dá)載體基因表達(dá)載體。構(gòu)建pET23a-gfp-mph-r過(guò)程中應(yīng)用 Ca2+Ca2+處理使之成為感受態(tài)細(xì)胞。研究人員不直接將目的基因mph-r導(dǎo)入大腸桿菌的原因是 使目的基因mph-r能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)使目的基因mph-r能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)。
（2）圖中T7啟動(dòng)子的功能為 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)并驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNARNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)并驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。gfp作為一種融合標(biāo)簽，能很好地提高蛋白的表達(dá)量，因此還添加了TEV蛋白酶切位點(diǎn)（TEVsite），其目的是 通過(guò)TEV蛋白酶去掉gfp中融合標(biāo)簽得到大量純的mph-r蛋白通過(guò)TEV蛋白酶去掉gfp中融合標(biāo)簽得到大量純的mph-r蛋白。
（3）為了篩選出具有目的基因的大腸桿菌，應(yīng)將常規(guī)轉(zhuǎn)化后的菌液涂布到含 氨芐青霉素（Ampr）氨芐青霉素（Ampr）的LB固體培養(yǎng)基上。
（4）測(cè)序成功的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌用SDS-PAGE電泳檢測(cè)全細(xì)胞蛋白表達(dá)情況，如圖2所示，第4泳道為mph-r單獨(dú)表達(dá)的表達(dá)情況，第5泳道為gfp單獨(dú)表達(dá)的表達(dá)情況，請(qǐng)問(wèn)：1至3泳道哪一個(gè)為融合gfp標(biāo)簽的mph-r蛋白？為什么？第1泳道，根據(jù)第4泳道m(xù)ph-r蛋白大小約35kD，而第5泳道gfp中蛋白大小約30kD，融合gfp標(biāo)簽的mph-r蛋白約為65kD，第3泳道不符合。根據(jù)題意，融合gfp標(biāo)簽后的mph-r的表達(dá)量得到顯著提高，所以蛋白表達(dá)量更大，應(yīng)為第1泳道第1泳道，根據(jù)第4泳道m(xù)ph-r蛋白大小約35kD，而第5泳道gfp中蛋白大小約30kD，融合gfp標(biāo)簽的mph-r蛋白約為65kD，第3泳道不符合。根據(jù)題意，融合gfp標(biāo)簽后的mph-r的表達(dá)量得到顯著提高，所以蛋白表達(dá)量更大，應(yīng)為第1泳道。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】基因表達(dá)載體；Ca2+；使目的基因mph-r能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)；RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)并驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA；通過(guò)TEV蛋白酶去掉gfp中融合標(biāo)簽得到大量純的mph-r蛋白；氨芐青霉素（Ampr）；第1泳道，根據(jù)第4泳道m(xù)ph-r蛋白大小約35kD，而第5泳道gfp中蛋白大小約30kD，融合gfp標(biāo)簽的mph-r蛋白約為65kD，第3泳道不符合。根據(jù)題意，融合gfp標(biāo)簽后的mph-r的表達(dá)量得到顯著提高，所以蛋白表達(dá)量更大，應(yīng)為第1泳道
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：11引用：3難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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