請回答下列關(guān)于基因工程的相關(guān)問題：
（1）在標(biāo)準(zhǔn)的PCR體系中需要加入

模板、原料、酶

模板、原料、酶

和

2

2

種引物，引物的作用是

使Taq酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

使Taq酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

。
（2）構(gòu)建基因表達載體時，需要用

DNA連接酶

DNA連接酶

將目的基因與載體連接，因此需要在目的基因兩側(cè)加上酶切位點。PCR完成以后，常采用

瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳

來鑒定PCR的產(chǎn)物。
（3）用兩種酶切割目的基因和質(zhì)粒要優(yōu)于同種酶切割，其優(yōu)點是

可以保證目的基因和質(zhì)粒的正向連接，同時避免目的基因、質(zhì)粒發(fā)生自連成環(huán)

可以保證目的基因和質(zhì)粒的正向連接，同時避免目的基因、質(zhì)粒發(fā)生自連成環(huán)

。
（4）若要用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細胞，應(yīng)選用下圖中的

D

D

作為表達載體（圖中→代表目的基因，箭頭方向代表轉(zhuǎn)錄方向；Bar基因是標(biāo)記基因），原因是

表達載體需要具備啟動子、終止子和標(biāo)記基因等元件，且需將目的基因正確插到T-DNA的啟動子和終止子之間

表達載體需要具備啟動子、終止子和標(biāo)記基因等元件，且需將目的基因正確插到T-DNA的啟動子和終止子之間

。