家禽體內(nèi)缺少能降解纖維素的酶，影響了家禽對谷物飼料中纖維素的吸收和利用?？蒲腥藛T將W基因（編碼一種降解纖維素的酶）導(dǎo)入乳酸桿菌細胞內(nèi)，再將其添加到谷物飼料中，以提高家禽對纖維素的利用?；卮鹣铝袉栴}。
（1）家禽的胃腸道菌群中，乳酸桿菌占一定的優(yōu)勢，其細胞呼吸產(chǎn)生的乳酸等可抑制家禽胃腸道中有害細菌的生長和繁殖，維持腸道的正常機能，這體現(xiàn)了乳酸桿菌和家禽間
互利共生
互利共生
的種間關(guān)系。
（2）如圖1是從枯草芽孢桿菌細胞克隆得到的含W基因的DNA片段，其中乙鏈是轉(zhuǎn)錄模板鏈；圖2是所用的質(zhì)粒載體。表中EcoRⅠ、BamHⅠ、KpmⅠ、MfeⅠ、HindⅢ是限制酶及其切割位點（均形成黏性末端）。
| 限制酶 |
EcoRⅠ |
BamHⅠ |
KpmⅠ |
MfeⅠ |
HindⅢ |
| 識別序列及其切割位點 |
5′-G↓AATTC-3′
3′-CTTAA↑G-5′ |
5′-G↓GATCC-3
3′CCTAG↓G-5 |
5′-GGTAC↓C-3
3′-C↑CATGG-5 |
5′-C↓AATTG-3
3′-GTTAA↑C-5 |
5′A↓AGCTT-3′
3′-TTCGA↑A-5′ |
①為使W基因在乳酸桿菌中表達，構(gòu)建基因表達載體時，切割含W基因的DNA片段需選用EcoRⅠ和HindⅢ限制酶，切割質(zhì)粒的限制酶需選用
MfeⅠ
MfeⅠ
（填“KpnⅠ”或“MfeⅠ”）和HindⅢ，再通過DNA連接酶能將W基因與質(zhì)粒進行拼接成重組質(zhì)粒，說明除HindⅢ外，所選限制酶應(yīng)要滿足的條件是
a.不能破壞目的基因；b.目的基因首尾都要有切點；c.質(zhì)粒要確保至少含有一個完整的標記基因；d.質(zhì)粒上的切點要位于啟動子之后、終止子之前；e.目的基因和質(zhì)粒切割后形成的粘性末端還要能互補配對
a.不能破壞目的基因；b.目的基因首尾都要有切點；c.質(zhì)粒要確保至少含有一個完整的標記基因；d.質(zhì)粒上的切點要位于啟動子之后、終止子之前；e.目的基因和質(zhì)粒切割后形成的粘性末端還要能互補配對
。
②將所得的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化乳酸桿菌后，可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選，得到的乳酸桿菌還需進行分子水平檢測是否導(dǎo)入了W基因，原因是
構(gòu)建的基因表達載體只含有標記基因氨芐青霉素抗性基因，所以應(yīng)使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選
構(gòu)建的基因表達載體只含有標記基因氨芐青霉素抗性基因，所以應(yīng)使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選
。
（3）對導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌還需進行個體生物學水平的檢測，以確定目的基因（W基因）是否起作用。檢測過程如下：
①配制固體鑒定培養(yǎng)基：除加入水、無機鹽、剛果紅、維生素、氮源、瓊脂外，還需要添
纖維素
纖維素
。
②將培養(yǎng)的乳酸桿菌、
導(dǎo)入空質(zhì)粒的乳酸菌
導(dǎo)入空質(zhì)粒的乳酸菌
和導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌菌液分別接種于固體鑒定培養(yǎng)基上（編號為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組）。其中Ⅱ組的目的是
排除質(zhì)粒自身的影響
排除質(zhì)粒自身的影響
。
③觀察結(jié)果：只有導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌在此培養(yǎng)基上出現(xiàn)了
以菌落為中心的透明圈
以菌落為中心的透明圈
。
