為使甘藍(lán)具有抗除草劑能力，科研人員將除草劑草甘膦抗性基因轉(zhuǎn)入甘藍(lán)植株，獲得抗草甘膦轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)。

（1）草甘膦抗性基因一條鏈的兩端序列如圖2，采用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增草甘膦抗性基因，應(yīng)選用的引物組合為

A

A

。
A．5′-CTTGGATGAT-3′和5′-TCTGTTGAAT-3′
B．5′-CTTGGATGAT-3′和5′-TAAGTTGTCT-3′
C．5′-ATTCAACAGA-3′和5′-ATCATCCAAG-3′
D．5′-ATTCAACAGA-3′和5′-GAACCTACTA-3′
（2）基因工程中最核心的步驟是

①

①

（填數(shù)字編號(hào)），其目的是

使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用

使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用

。
（3）步驟②用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理農(nóng)桿菌后獲得感受態(tài)細(xì)胞，以便將重組質(zhì)粒導(dǎo)入。步驟③將農(nóng)桿菌與甘藍(lán)愈傷組織共培養(yǎng)后，在步驟④的培養(yǎng)基中添加

潮霉素

潮霉素

以便篩選出含目的基因的甘藍(lán)植株。
（4）若目的基因用BamHⅠ和BglⅡ剪切，質(zhì)粒用BamHⅠ剪切，酶切后的目的基因存在正向與反向兩種連接方式，可用

BamHI和EcoRI

BamHI和EcoRI

酶對(duì)兩種重組質(zhì)粒進(jìn)行剪切，通過凝膠電泳分析產(chǎn)物大小進(jìn)行區(qū)分，如圖3所示，圖中

樣品2

樣品2

（樣品1/樣品2）為所需基因表達(dá)載體。

限制酶	識(shí)別序列和切割位點(diǎn)
BamHⅠ	-G′GATCC-
BglⅡ	-A′GATCT-
EcoRⅠ	-G′AATTC-